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大甫哥

银虫 (小有名气)

[求助] 求助，taqman探针结果分析 已有1人参与

兄弟我昨天刚做了一次pcr，紫色线为样品，绿色为阳性对照，红色为阴性对照，每个样品平行做2孔，为什么其中一个样品Ct值出现的早，相对荧光值会低？（明显低于阳性对照）

求助，taqman探针结果分析
image002.jpg
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科研，我来了
1楼 2014-05-07 08:40:47
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love_st

金虫 (著名写手)
★
大甫哥(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-07 15:28:30
这是一个蛮有意思的问题，我自己也碰过类似的问题，想通过优化体系进行调整，却无法改变，想问你的是，你用的是否是商用的试剂盒，阳性对照和实际的样品的基质是否一致？如果是商用的试剂盒阳性对照往往会是质粒或者假病毒，而不是实际的样本，而实际的样本的来源会比阳性对照复杂很多。
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2楼2014-05-07 11:12:38
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jiaolong11a

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
大甫哥(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-07 15:28:17
信息量有些少，比如样品如何获得的，是不是都平行做的。另外一般都看ct值的大小，会考虑荧光信号值吗?
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多情总被无情扰。。。愁
3楼2014-05-07 14:59:59
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大甫哥

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jiaolong11a at 2014-05-07 14:59:59
信息量有些少，比如样品如何获得的，是不是都平行做的。另外一般都看ct值的大小，会考虑荧光信号值吗?

样品是加巯基标记合成的DNA序列，RFU较低的那个是已经标记到纳米金颗粒上，取样直接进行定量PCR。阳性对照是质粒标准品,Ct值虽然重要，但是荧光信号反应体系是否最佳，
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科研，我来了
4楼2014-05-07 16:44:38
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wardwaads

银虫 (小有名气)
非常有意思的问题，楼主很细心。我也注意到同样的现象，但不知道原因。楼主找到原因了吗？
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5楼2015-12-03 14:49:49
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