24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 2475  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wyf625356

铁虫 (小有名气)

[求助] taqman探针进行荧光定量PCR结果分析 已有2人参与

我需要扩增的DNA序列是CACGCGGTTCTGGTATGAAAGAAACCGCTGCTGCTAAATTCGAACGCCAGCACATGGACAGCCCAGATCTGGGTACCGACGACGACGACAAGGCCATGGCTGATATCGGATCCGAATTCGAGCTC(125bp)
设计的引物及探针如下
PRIMER  F:         CACGCGGTTCTGGTATGA(18bp)
PRIMER  R:         GAGCTCGAATTCGGATCC (18bp)
taqman探针(报告基团JOE)        CCGCTGCTGCTAAATTCGAAC    (21bp)

实时荧光定量pcr扩增条件
93℃   120s
93℃   10s
60℃  30s,cycles45

但是结果如图1,没有明显的荧光对数增长曲线


我跑琼脂糖凝胶电泳,图2结果,1是marker,2是探针,3,是Taqman的扩增结果4,是常规PCR结果

其中第三道有杂条带,大家帮我分析一下,没有荧光的原因

taqman探针进行荧光定量PCR结果分析
fig.1.png


taqman探针进行荧光定量PCR结果分析-1
fig.2.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wyf625356

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-07-24 17:46:00
引物偏短,我的软件预测你的引物Tm在54℃、56℃,Tm低。

可是我扩增条带,跑胶是有的目的条带的;另外我自己的软件温度是有60℃的
5楼2014-07-25 09:12:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

vege的桌子

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
探针的TM值比引物高多少?
2楼2014-07-23 16:31:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wyf625356

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by vege的桌子 at 2014-07-23 16:31:47
探针的TM值比引物高多少?

引物是61.3,61.1,探针是69.7
3楼2014-07-24 14:01:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引物偏短,我的软件预测你的引物Tm在54℃、56℃,Tm低。
4楼2014-07-24 17:46:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 通信工程求调剂!!! +4 zlb770521 2026-04-14 4/200 2026-04-14 18:19 by lbsjt
[考研] 一志愿211,化学310分,本科重点双非,求调剂 +24 努力奋斗112 2026-04-08 24/1200 2026-04-14 18:02 by lhj2009
[考研] 08工学 309分求调剂 +12 Yin DY 2026-04-08 12/600 2026-04-14 17:49 by lhj2009
[考研] 复试调剂 +18 积极向上; 2026-04-10 20/1000 2026-04-14 16:11 by zs92450
[考研] 305求调剂 +8 玛卡巴卡boom 2026-04-11 8/400 2026-04-14 09:04 by pengliang8036
[考研] 一志愿哈工大 085600 277 12材科基求调剂 5+5 chenny174 2026-04-10 37/1850 2026-04-14 07:39 by Abskk
[考研] 一志愿华工085600 331分 +7 天下ww 2026-04-09 7/350 2026-04-13 09:01 by lhj2009
[考研] 344 材料专业 求调剂211 无地域要求 +8 hualkop 2026-04-11 8/400 2026-04-12 22:24 by fqwang
[考研] 电子信息279求调剂,有书读就行 +8 wwwooden 2026-04-08 11/550 2026-04-11 20:22 by cq2548
[考研] 求调剂,一志愿大连理工大学354分 +5 雨声余生 2026-04-11 6/300 2026-04-11 16:12 by 雨声余生
[考研] 283求调剂,工科! +12 苏打水7777 2026-04-08 12/600 2026-04-11 10:28 by 逆水乘风
[考研] 22408 352分求调剂0854类 +4 努力的夏末 2026-04-09 4/200 2026-04-11 09:57 by zhq0425
[考研] 337求调剂 +4 研s. 2026-04-10 4/200 2026-04-11 08:57 by zhq0425
[考研] 求调剂 材料与工程 324分 专硕 +19 翩翩一书生 2026-04-10 21/1050 2026-04-10 11:41 by wp06
[考研] 一志愿中南大学物理学,英一66,求调剂 +4 长烟旖旎 2026-04-08 5/250 2026-04-10 10:31 by 颖果儿
[考研] 085601初试330分找调剂 +10 流心奶黄包l 2026-04-09 10/500 2026-04-10 08:14 by Sammy2
[考研] 本科211 工科085400 280分求调剂 可跨专业 +3 LZH(等待调剂中 2026-04-09 3/150 2026-04-09 21:29 by wutongshun
[考研] 材料化工总分334求调剂 +16 Riot2025 2026-04-08 17/850 2026-04-09 20:19 by maddjdld
[考研] 生物学328分求调剂 +9 闪电kkl 2026-04-08 10/500 2026-04-08 21:42 by liuhuiying09
[考研] 求调剂,现在还能填的 +3 上岸小莹加油 2026-04-08 3/150 2026-04-08 14:30 by zhq0425
信息提示
请填处理意见