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wuweifeng710

木虫 (正式写手)

[求助] CTAB法提DNA,沉淀DNA有漂亮的絮状物,提取完电泳却什么都没有,大家来帮帮忙 已有8人参与

最近一直在用CTAB法提DNA,沉淀DNA有漂亮的絮状物,用75%的乙醇洗沉淀2次,用TE溶解后,37摄氏度水浴30min,表现为溶液粘稠,完后电泳却什么都没有,连点样孔都没有亮,估计是多糖污染,但为什么点样孔一点亮都没有,有点marker,marker表现很正常,我沉淀完dna的后续操作是这样的
1.用异丙醇沉淀DNA,出现絮状物(有用过无水乙醇沉淀,也是有沉淀,电泳完什么也没看到),4℃下5000rpm离心5分钟
2.弃上清,用75%乙醇洗沉淀,5000rpm离心1min,重复1次
3.在超净工作台抽干乙醇(大约15分钟左右)
4.TE溶解,加少许RNase水浴30~60min
5.跑胶(有尝试水浴完直接跑胶,也有在室温下或4℃下过夜后跑胶)
大家来帮帮忙!帮我找找原因,谢谢大家了
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逍遥e宝

铁杆木虫 (正式写手)

我爱黄赌毒

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-23 12:10:30
乙醇漂洗就洗洗表面即可,不需要把沉淀吹散离心的~~或者,你用TE和RNase除完rna后用 30μl  3M  NaAc(PH=5.2),1 ml  无水乙醇的混合物 -20℃ 1h  沉淀下 DNA  。沉淀 4℃离心15min  12000转。然后再用 TE  溶解 试试
无数老鼠的生命祭奠了我被偷走的那五年---------------forever宝
10楼2014-07-23 09:51:40
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usky_4

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-07-23 12:10:04
TE溶解或RNase处理之后有测浓度么?是否正常?
TE溶液是新配制的么?pH还正常不?
你提的是植物细胞么?CTAB提出来的DNA很容易成团,不易溶解,可以试试增加溶解时间。能够看到絮状或丝状说明DNA沉淀是没问题的,建议之前提的DNA如果没有扔掉的话在37°多放几天,然后再跑一下胶试试。
下次再见面的时候,我们一定会笑着相遇吧
6楼2014-07-23 02:30:05
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njtx888

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-25 13:50:46
你好!用CTAB法提取DNA的过程中钠离子浓度必须大于1mol/L,否则DNA与CTAB、杂质共沉淀,产生絮状并且上清中回收不到DNA,我估计你的裂解液中钠离子浓度不足,需要加入氯化钠,这些都是经验之谈,记得给红花啊,谢谢!
14楼2014-07-24 13:12:56
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普通回帖

幺哥撸啊撸

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
wuweifeng710(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-22 20:40:47
我觉得有可能是材料不够,还有就是蛋白质去除不干净,你换苯酚-氯仿-异戊醇试试。
2楼2014-07-22 20:33:46
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
wuweifeng710(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-23 12:04:43
如果有漂亮的絮状物,直接用牙签挑出,70%乙醇洗一次,离心,风干,充分溶解,测浓度+电泳,再试试。
3楼2014-07-22 20:58:32
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wuweifeng710

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 幺哥撸啊撸 at 2014-07-22 20:33:46
我觉得有可能是材料不够,还有就是蛋白质去除不干净,你换苯酚-氯仿-异戊醇试试。

我有专门称量一下,1.5ml的EP管,大约0.1g的量,且有用酚-氯仿-异戊醇
4楼2014-07-22 21:34:04
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wuweifeng710

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by stone2239 at 2014-07-22 20:58:32
如果有漂亮的絮状物,直接用牙签挑出,70%乙醇洗一次,离心,风干,充分溶解,测浓度+电泳,再试试。

这个办法试过,有条带,但用75%乙醇洗的,跑出来的结果不理想
5楼2014-07-22 21:35:31
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三蛰

铜虫 (小有名气)

★
wuweifeng710(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-23 12:10:19
离完心能看到白色沉淀不?我怀疑你是在用乙醇洗脱的时候,把dna倒掉了。。。很多时候不注意就把它倒掉了。
我不会!
7楼2014-07-23 09:23:51
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wuweifeng710

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 三蛰 at 2014-07-23 09:23:51
离完心能看到白色沉淀不?我怀疑你是在用乙醇洗脱的时候,把dna倒掉了。。。很多时候不注意就把它倒掉了。

有白色沉淀,正是感觉一切都很正常,跑出来却什么都没有,很困惑
8楼2014-07-23 09:47:16
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wuweifeng710

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by usky_4 at 2014-07-23 02:30:05
TE溶解或RNase处理之后有测浓度么?是否正常?
TE溶液是新配制的么?pH还正常不?
你提的是植物细胞么?CTAB提出来的DNA很容易成团,不易溶解,可以试试增加溶解时间。能够看到絮状或丝状说明DNA沉淀是没问题的, ...

好的,我试试去
9楼2014-07-23 09:49:38
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