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wuweifeng710

木虫 (正式写手)

[求助] CTAB法提DNA,沉淀DNA有漂亮的絮状物,提取完电泳却什么都没有,大家来帮帮忙 已有8人参与

最近一直在用CTAB法提DNA,沉淀DNA有漂亮的絮状物,用75%的乙醇洗沉淀2次,用TE溶解后,37摄氏度水浴30min,表现为溶液粘稠,完后电泳却什么都没有,连点样孔都没有亮,估计是多糖污染,但为什么点样孔一点亮都没有,有点marker,marker表现很正常,我沉淀完dna的后续操作是这样的
1.用异丙醇沉淀DNA,出现絮状物(有用过无水乙醇沉淀,也是有沉淀,电泳完什么也没看到),4℃下5000rpm离心5分钟
2.弃上清,用75%乙醇洗沉淀,5000rpm离心1min,重复1次
3.在超净工作台抽干乙醇(大约15分钟左右)
4.TE溶解,加少许RNase水浴30~60min
5.跑胶(有尝试水浴完直接跑胶,也有在室温下或4℃下过夜后跑胶)
大家来帮帮忙!帮我找找原因,谢谢大家了
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wuweifeng710

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by stone2239 at 2014-07-22 20:58:32
如果有漂亮的絮状物,直接用牙签挑出,70%乙醇洗一次,离心,风干,充分溶解,测浓度+电泳,再试试。

这个办法试过,有条带,但用75%乙醇洗的,跑出来的结果不理想
5楼2014-07-22 21:35:31
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幺哥撸啊撸

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wuweifeng710(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-22 20:40:47
我觉得有可能是材料不够,还有就是蛋白质去除不干净,你换苯酚-氯仿-异戊醇试试。
2楼2014-07-22 20:33:46
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wuweifeng710(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-23 12:04:43
如果有漂亮的絮状物,直接用牙签挑出,70%乙醇洗一次,离心,风干,充分溶解,测浓度+电泳,再试试。
3楼2014-07-22 20:58:32
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wuweifeng710

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 幺哥撸啊撸 at 2014-07-22 20:33:46
我觉得有可能是材料不够,还有就是蛋白质去除不干净,你换苯酚-氯仿-异戊醇试试。

我有专门称量一下,1.5ml的EP管,大约0.1g的量,且有用酚-氯仿-异戊醇
4楼2014-07-22 21:34:04
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