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【求助/交流】CTAB法提DNA 已有2人参与
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CTAB法提DNA时，是先研磨好再加CTAB缓冲液还是先加CTAB缓冲液再研磨？ 我提的是真菌DNA ~急！ 为什么我提的量少又不纯呢？ |
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2楼2011-03-24 10:33:44
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
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CTAB法： — 取幼嫩的菌丝体，用液氮研成粉末，每 0.8 g 装入 10 mL 的离心管中； — 预热 1.5×CTAB 到 95 ℃，加 2 mL 到装有菌丝粉末的离心管中，混匀； — 立即置于 65 ℃ 水浴 30 min，每分钟上下颠倒 1 次； — 12000 g 离心 5 分钟； —吸取上清液，加等体积的氯仿，上下颠倒数次；12000 g 离心 5 分钟； —吸取上清液，加等体积的酚，上下颠倒数次；12000 g 离心 5 分钟； —吸取上清液，加等体积的氯仿，上下颠倒数次；12000 g 离心 5 分钟； —取上清，加入 2 倍体积的无水乙醇和 1/10 体积的 10 M NH4Ac，混匀，室温放置 10 min； — 12000 g 离心 10 分钟，去上清，用 75% 乙醇洗沉淀，自然干燥； —加 100uL 的 TE 或无菌水溶解沉淀。 |
3楼2011-03-24 12:00:25