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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » CTAB法提DNA，沉淀DNA有漂亮的絮状物，提取完电泳却什么都没有，大家来帮帮忙
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baili127

铁虫 (小有名气)
用酚氯仿异戊醇提DNA，这个方法真好！

[ 发自小木虫客户端 ]
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11楼2014-07-23 10:06:29
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a50044758

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-25 13:50:30
是细胞DNA吗？要用蛋白酶K消化组蛋白，不然你的絮状物全是RNA，DNA会因为和组蛋白结合而被酚仿除去了。
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12楼2014-07-23 22:36:27
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wuweifeng710

木虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by a50044758 at 2014-07-23 22:36:27
是细胞DNA吗？要用蛋白酶K消化组蛋白，不然你的絮状物全是RNA，DNA会因为和组蛋白结合而被酚仿除去了。

是细胞DNA，RNA不是容易降解吗，组蛋白酶k好像在植物基因组提取中很少有人用到
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13楼2014-07-24 12:49:04
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njtx888

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-25 13:50:46
你好！用CTAB法提取DNA的过程中钠离子浓度必须大于1mol/L，否则DNA与CTAB、杂质共沉淀，产生絮状并且上清中回收不到DNA，我估计你的裂解液中钠离子浓度不足，需要加入氯化钠，这些都是经验之谈，记得给红花啊，谢谢！
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14楼2014-07-24 13:12:56
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mojx

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流经验！ 2014-07-25 13:51:04
引用回帖:
6楼: Originally posted by usky_4 at 2014-07-23 02:30:05
TE溶解或RNase处理之后有测浓度么？是否正常？
TE溶液是新配制的么？pH还正常不？
你提的是植物细胞么？CTAB提出来的DNA很容易成团，不易溶解，可以试试增加溶解时间。能够看到絮状或丝状说明DNA沉淀是没问题的， ...

的确
我提的就是植物DNA
有几次发现有絮状沉淀
但是TE溶解后马上测的值却很不理想
一次偶然的机会下
我把这些测得很不理想的样品留下（以往都是立马扔掉的）
过几天再测
指标出乎意料地理想！标准的凹凸曲线！
所以提取植物DNA的各位可以参考啦
他们溶解的时间确实需要多一些
再碰到提取过程没问题而测定测不粗来的情况可以放几天再测
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15楼2014-07-25 09:01:57
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usky_4

银虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by mojx at 2014-07-25 09:01:57
的确
我提的就是植物DNA
有几次发现有絮状沉淀
但是TE溶解后马上测的值却很不理想
一次偶然的机会下
我把这些测得很不理想的样品留下（以往都是立马扔掉的）
过几天再测
指标出乎意料地理想！标准的凹凸曲 ...

哈哈，解决就好啦

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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下次再见面的时候，我们一定会笑着相遇吧
16楼2014-07-25 09:45:21
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-80度的温暖

新虫 (初入文坛)
你在用异丙醇沉淀时加入高盐溶液去除多糖污染，或者用异丙醇沉淀后把絮状物去了再离心看看！！！
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17楼2014-07-25 09:46:34
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biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚：专业/专注/专心

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你自己把它弄没了，我们也是直接将絮状物挑出来。
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年末优惠荧光定量pcr、WB、ELISA技术服务一律六折！交流锤炼知识，用心构筑桥梁，以更优质的产品及技术服务助力科研；QQ：2513165427；Email：b
18楼2014-07-25 10:30:07
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wuweifeng710

木虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by njtx888 at 2014-07-24 13:12:56
你好！用CTAB法提取DNA的过程中钠离子浓度必须大于1mol/L，否则DNA与CTAB、杂质共沉淀，产生絮状并且上清中回收不到DNA，我估计你的裂解液中钠离子浓度不足，需要加入氯化钠，这些都是经验之谈，记得给红花啊，谢谢 ...

裂解液里面氯化钠是1.4M
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19楼2014-07-25 10:59:18
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wuweifeng710

木虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by -80度的温暖 at 2014-07-25 09:46:34
你在用异丙醇沉淀时加入高盐溶液去除多糖污染，或者用异丙醇沉淀后把絮状物去了再离心看看！！！

好的，我试试
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20楼2014-07-25 11:00:11
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