【答案】应助回帖

11楼2014-07-23 10:06:29

a50044758

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【答案】应助回帖

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是细胞DNA吗？要用蛋白酶K消化组蛋白，不然你的絮状物全是RNA，DNA会因为和组蛋白结合而被酚仿除去了。

12楼2014-07-23 22:36:27

wuweifeng710

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引用回帖:

12楼: Originally posted by a50044758 at 2014-07-23 22:36:27
是细胞DNA吗？要用蛋白酶K消化组蛋白，不然你的絮状物全是RNA，DNA会因为和组蛋白结合而被酚仿除去了。

是细胞DNA，RNA不是容易降解吗，组蛋白酶k好像在植物基因组提取中很少有人用到

13楼2014-07-24 12:49:04

njtx888

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【答案】应助回帖

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你好！用CTAB法提取DNA的过程中钠离子浓度必须大于1mol/L，否则DNA与CTAB、杂质共沉淀，产生絮状并且上清中回收不到DNA，我估计你的裂解液中钠离子浓度不足，需要加入氯化钠，这些都是经验之谈，记得给红花啊，谢谢！

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14楼2014-07-24 13:12:56

mojx

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引用回帖:

6楼: Originally posted by usky_4 at 2014-07-23 02:30:05
TE溶解或RNase处理之后有测浓度么？是否正常？
TE溶液是新配制的么？pH还正常不？
你提的是植物细胞么？CTAB提出来的DNA很容易成团，不易溶解，可以试试增加溶解时间。能够看到絮状或丝状说明DNA沉淀是没问题的， ...

的确
我提的就是植物DNA
有几次发现有絮状沉淀
但是TE溶解后马上测的值却很不理想
一次偶然的机会下
我把这些测得很不理想的样品留下（以往都是立马扔掉的）
过几天再测
指标出乎意料地理想！标准的凹凸曲线！
所以提取植物DNA的各位可以参考啦
他们溶解的时间确实需要多一些
再碰到提取过程没问题而测定测不粗来的情况可以放几天再测

15楼2014-07-25 09:01:57

usky_4

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引用回帖:

15楼: Originally posted by mojx at 2014-07-25 09:01:57
的确
我提的就是植物DNA
有几次发现有絮状沉淀
但是TE溶解后马上测的值却很不理想
一次偶然的机会下
我把这些测得很不理想的样品留下（以往都是立马扔掉的）
过几天再测
指标出乎意料地理想！标准的凹凸曲 ...

哈哈，解决就好啦

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

下次再见面的时候，我们一定会笑着相遇吧

16楼2014-07-25 09:45:21

-80度的温暖

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你在用异丙醇沉淀时加入高盐溶液去除多糖污染，或者用异丙醇沉淀后把絮状物去了再离心看看！！！

17楼2014-07-25 09:46:34

biotech_zhou

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你自己把它弄没了，我们也是直接将絮状物挑出来。

年末优惠荧光定量pcr、WB、ELISA技术服务一律六折！交流锤炼知识，用心构筑桥梁，以更优质的产品及技术服务助力科研；QQ：2513165427；Email：b

18楼2014-07-25 10:30:07

wuweifeng710

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14楼: Originally posted by njtx888 at 2014-07-24 13:12:56
你好！用CTAB法提取DNA的过程中钠离子浓度必须大于1mol/L，否则DNA与CTAB、杂质共沉淀，产生絮状并且上清中回收不到DNA，我估计你的裂解液中钠离子浓度不足，需要加入氯化钠，这些都是经验之谈，记得给红花啊，谢谢 ...

裂解液里面氯化钠是1.4M

19楼2014-07-25 10:59:18

wuweifeng710

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17楼: Originally posted by -80度的温暖 at 2014-07-25 09:46:34
你在用异丙醇沉淀时加入高盐溶液去除多糖污染，或者用异丙醇沉淀后把絮状物去了再离心看看！！！

好的，我试试

20楼2014-07-25 11:00:11