| 查看: 1327 | 回复: 20 | ||
馨-馨银虫 (小有名气)
|
[求助]
连接转化问题 已有6人参与
|
|
|
各位大神，小妹最近做电转化，平板上一直什么菌都不长，干干净净，不知道是什么原因啊。 背景条件: 1. 目的片段是用TAKARA公司的EX Taq 酶通过简并引物PCR，在通过胶回收纯化过后，测浓度114.99ng/ul，大小约1.5kb。 2.连接体系：takara 公司的T-18-Vector 取0.5ul，上述1中的目的片段取1ul, 3.5ul 无菌水，5ul 的Soultion I ，总体积10ul，16℃连接11h. 3. 10ul 连接体系加入到100ul DH5 α 感受态细胞中，电转，2500V。 4.加入600ul LB，37℃摇床1h。 5.倒板：200ul 固体培养基 Amp加 400ul, x-gal 加160ul, IPTG 加80ul. 6.涂板：涂2个板，每个300ul。 7.培养：37℃恒温培养12-16小时。 8.结果：培养过后，什么都不长，平板干干净净。 |
回复此楼» 猜你喜欢
科研孤儿太难了
已经有15人回复
-
让我中一个面上吧！
已经有10人回复
-
言之凿凿，明天官网会通知放榜？
已经有17人回复
-
时间戳又变了
已经有17人回复
-
今天系统多次维护，明天很可能放榜！
已经有11人回复
-
时间戳变了，能看出什么问题？
已经有23人回复
-
只有每年这种时候来逛逛小木虫
已经有22人回复
-
放榜前的不淡定
已经有12人回复
-
重要消息，中午系统在维护
已经有12人回复
-
今天基金会出结果吗？20260819
已经有15人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 乳酸杆菌转化问题
已经有8人回复
- 本人目前遇到连接问题
已经有17人回复
- 做连接转化时遇到了问题，请教除了具体操作步骤，还需要详细注意什么细节？
已经有13人回复
- 急求:PCR 产物连接转化 涂板后就是不长 到底是怎么回事啊
已经有5人回复
- 酶切、连接和转化
已经有9人回复
- 连接转化不长菌是怎么回事？？？
已经有15人回复
- 单酶切的大片段连接转化及多个片段的连接转化问题
已经有8人回复
- 目的基因的连接与转化
已经有3人回复
- 长片段连接问题
已经有12人回复
- 大片段连接问题
已经有20人回复
- 连接转化出现很多微小的菌落
已经有14人回复
- 为什么最近做连接转化总是失败
已经有20人回复
- 大肠杆菌转化问题
已经有5人回复
- 连接与转化问题
已经有5人回复
- 连接转化不成功问题
已经有17人回复
- 连接转化进大肠杆菌BL21
已经有6人回复
- 求助关于转化的问题？
已经有22人回复
- 目的基因连接pGEX-6p-1进行转化的问题
已经有14人回复
- 连接体系的确定
已经有19人回复
- 胶回收产物连接转化后菌液PCR电泳条带出现问题
已经有8人回复
- 【求助/交流】连接转化长菌有质粒，但是没有目的片段，怎么回事？？
已经有20人回复
- 【求助/交流】转化后涂板问题
已经有10人回复
代德艳
铁虫 (初入文坛)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 77.5
- 散金: 100
- 帖子: 31
- 在线: 14.4小时
- 虫号: 3069204
- 注册: 2014-03-19
- 性别: MM
- 专业: 植物遗传学
5楼2014-07-16 16:02:07
2楼2014-07-16 12:40:50
馨-馨
银虫 (小有名气)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 135.4
- 散金: 34
- 帖子: 115
- 在线: 55.3小时
- 虫号: 1390789
- 注册: 2011-09-05
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2014-07-16 14:25:09
4楼2014-07-16 14:33:32
dongbinbin89
金虫 (初入文坛)
idoubind
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 1853.5
- 帖子: 50
- 在线: 37.1小时
- 虫号: 3134880
- 注册: 2014-04-14
- 性别: GG
- 专业: 微生物资源与分类学
6楼2014-07-17 04:36:19
zhaiaguan
金虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 925.7
- 散金: 30
- 帖子: 33
- 在线: 25.6小时
- 虫号: 2938093
- 注册: 2014-01-18
- 专业: 临床兽医学
7楼2014-07-17 11:32:58
馨-馨
银虫 (小有名气)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 135.4
- 散金: 34
- 帖子: 115
- 在线: 55.3小时
- 虫号: 1390789
- 注册: 2011-09-05
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
8楼2014-07-18 15:01:19
馨-馨
银虫 (小有名气)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 135.4
- 散金: 34
- 帖子: 115
- 在线: 55.3小时
- 虫号: 1390789
- 注册: 2011-09-05
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
9楼2014-07-18 15:02:16
馨-馨
银虫 (小有名气)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 135.4
- 散金: 34
- 帖子: 115
- 在线: 55.3小时
- 虫号: 1390789
- 注册: 2011-09-05
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
10楼2014-07-18 15:04:07
