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馨-馨银虫 (小有名气)
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连接转化问题 已有6人参与
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各位大神，小妹最近做电转化，平板上一直什么菌都不长，干干净净，不知道是什么原因啊。 背景条件: 1. 目的片段是用TAKARA公司的EX Taq 酶通过简并引物PCR，在通过胶回收纯化过后，测浓度114.99ng/ul，大小约1.5kb。 2.连接体系：takara 公司的T-18-Vector 取0.5ul，上述1中的目的片段取1ul, 3.5ul 无菌水，5ul 的Soultion I ，总体积10ul，16℃连接11h. 3. 10ul 连接体系加入到100ul DH5 α 感受态细胞中，电转，2500V。 4.加入600ul LB，37℃摇床1h。 5.倒板：200ul 固体培养基 Amp加 400ul, x-gal 加160ul, IPTG 加80ul. 6.涂板：涂2个板，每个300ul。 7.培养：37℃恒温培养12-16小时。 8.结果：培养过后，什么都不长，平板干干净净。 |
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