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hanbing7525

银虫 (小有名气)

[求助] 关于PCR引物 已有6人参与

拿到一个引物,该如何做起,从哪里开始。希望详细介绍。
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未婚

金虫 (正式写手)

分子小生

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
hanbing7525(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2014-07-16 08:36:02
hanbing7525: 金币+5 2014-07-17 22:11:26
经验比较浅,暂且回一个,若是dna引物,现pcr测序,然后sscp找多态,然后关联分析,若是rna的,就做个定量吧,测序找多态,应该还可以做cdna-sscp找多态。然后dna多态和rna多态相比或许能发现新问题呢!

[ 发自小木虫客户端 ]
You can't depend on luck, so you had better focus on the others!
2楼2014-07-16 01:33:54
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hanbing7525

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 未婚 at 2014-07-16 01:33:54
经验比较浅,暂且回一个,若是dna引物,现pcr测序,然后sscp找多态,然后关联分析,若是rna的,就做个定量吧,测序找多态,应该还可以做cdna-sscp找多态。然后dna多态和rna多态相比或许能发现新问题呢!
...

我是刚接触的,是dna的引物,多态性什么的不做不行?实验条件达不到。打算直接做温度梯度找退火温度,然后直接用。就是其它条件不知道怎么确定

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-07-16 23:41:10
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觅,蜜?

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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这个要看你的目的吧。。

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4楼2014-07-17 01:12:04
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hanbing7525

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 觅,蜜? at 2014-07-17 01:12:04
这个要看你的目的吧。。

基本的,就是要扩增啊,但是扩增前不是有很多条件要摸索吗?
5楼2014-07-17 22:13:28
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ALICEzz

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


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hanbing7525(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-18 10:27:02
先稀释一下引物然后寻找合适的酶开始扩增吧  摸索一下反应体系和条件  扩增目的条带出来以后再下一步构载体什么的  然后测个序验证一下
6楼2014-07-17 23:20:20
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匿名

用户注销 (著名写手)

感谢参与,应助指数 +1
本帖仅楼主可见
7楼2014-07-18 01:16:53
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匿名

用户注销 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
hanbing7525(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-07-18 10:26:50
hanbing7525: 金币+5 2014-07-19 09:25:12
本帖仅楼主可见
8楼2014-07-18 01:31:29
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lvshilu

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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hanbing7525(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-18 10:27:20
hanbing7525: 金币+3 2014-07-19 09:25:47
首先要熟悉PCR的基本原理
然后就是了解你的实验目的
最后才是按照说明稀释你的引物,开始PCR实验
可能说的都是白话,但我认为不是空话,你可以逐条对证,看是不是每一条你都解决了。
祝实验顺利
需要金币
9楼2014-07-18 09:24:03
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公仪珏

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-26 22:14:09
本人觉得吧,最重要的是吧引物说明书好好研究一下。引物开启前离心一下,然后根据说明书把它稀释成储存液。后面的工作就需要根据你的目的进行了。
10楼2014-07-18 21:56:33
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