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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 关于PCR引物
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hanbing7525

银虫 (小有名气)

[求助] 关于PCR引物 已有6人参与

拿到一个引物，该如何做起，从哪里开始。希望详细介绍。
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1楼 2014-07-15 22:12:35
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未婚

金虫 (正式写手)

分子小生

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hanbing7525(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2014-07-16 08:36:02
hanbing7525: 金币+5 2014-07-17 22:11:26
经验比较浅，暂且回一个，若是dna引物，现pcr测序，然后sscp找多态，然后关联分析，若是rna的，就做个定量吧，测序找多态，应该还可以做cdna-sscp找多态。然后dna多态和rna多态相比或许能发现新问题呢！

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You can't depend on luck, so you had better focus on the others!
2楼2014-07-16 01:33:54
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hanbing7525

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 未婚 at 2014-07-16 01:33:54
经验比较浅，暂且回一个，若是dna引物，现pcr测序，然后sscp找多态，然后关联分析，若是rna的，就做个定量吧，测序找多态，应该还可以做cdna-sscp找多态。然后dna多态和rna多态相比或许能发现新问题呢！
...

我是刚接触的，是dna的引物，多态性什么的不做不行？实验条件达不到。打算直接做温度梯度找退火温度，然后直接用。就是其它条件不知道怎么确定

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3楼2014-07-16 23:41:10
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觅，蜜？

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个要看你的目的吧。。

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4楼2014-07-17 01:12:04
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hanbing7525

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 觅，蜜？ at 2014-07-17 01:12:04
这个要看你的目的吧。。

基本的，就是要扩增啊，但是扩增前不是有很多条件要摸索吗？
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5楼2014-07-17 22:13:28
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ALICEzz

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
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hanbing7525(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-18 10:27:02
先稀释一下引物然后寻找合适的酶开始扩增吧  摸索一下反应体系和条件  扩增目的条带出来以后再下一步构载体什么的  然后测个序验证一下
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6楼2014-07-17 23:20:20
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匿名

用户注销 (著名写手)
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7楼2014-07-18 01:16:53
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匿名

用户注销 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
hanbing7525(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-07-18 10:26:50
hanbing7525: 金币+5 2014-07-19 09:25:12
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8楼2014-07-18 01:31:29
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lvshilu

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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hanbing7525(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-18 10:27:20
hanbing7525: 金币+3 2014-07-19 09:25:47
首先要熟悉PCR的基本原理
然后就是了解你的实验目的
最后才是按照说明稀释你的引物，开始PCR实验
可能说的都是白话，但我认为不是空话，你可以逐条对证，看是不是每一条你都解决了。
祝实验顺利
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需要金币
9楼2014-07-18 09:24:03
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公仪珏

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-26 22:14:09
本人觉得吧，最重要的是吧引物说明书好好研究一下。引物开启前离心一下，然后根据说明书把它稀释成储存液。后面的工作就需要根据你的目的进行了。
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10楼2014-07-18 21:56:33
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