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wyysunshine木虫 (知名作家)
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[求助]
求助：AT含量高的序列如何PCR？ 已有1人参与
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最近跑了一个序列，约750 bp。 降落PCR：1. 94度4 min；2. 94度30 s，3. 62度30 s，-1度/cycle，4. 63度1 min，5. go to 2，12次；6. 94度30 s，7. 57度30 s，8. 63度1 min，9. go to 6，24次；10. 63度10 min；11. 12度保存。 之后又试了不同的延伸温度，68啦，65啦，60啦都试过，可还是跑出来引物二聚体很多，带没有，就少数几个跑出来了。 把跑出来的几个进行回收测序，发现是我要的目的条带，但就是AT含量高达70%，请教下大家，AT含量高就很不好PCR吗？这个引物是自己根据现有的序列设计的，也不知道好不好，但通过Blast比对显示跟大多数植物是可以跑的出来的。PS，我这个是跑的它的一个内含子。谢谢各位大神支支招吧！3Q 小博士叩谢大家！！！  LEAFY.gif |
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