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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助：AT含量高的序列如何PCR？
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wyysunshine

木虫 (知名作家)

[求助] 求助：AT含量高的序列如何PCR？ 已有1人参与

最近跑了一个序列，约750 bp。
降落PCR：1. 94度4 min；2. 94度30 s，3. 62度30 s，-1度/cycle，4. 63度1 min，5. go to 2，12次；6. 94度30 s，7. 57度30 s，8. 63度1 min，9. go to 6，24次；10. 63度10 min；11. 12度保存。
之后又试了不同的延伸温度，68啦，65啦，60啦都试过，可还是跑出来引物二聚体很多，带没有，就少数几个跑出来了。
把跑出来的几个进行回收测序，发现是我要的目的条带，但就是AT含量高达70%，请教下大家，AT含量高就很不好PCR吗？这个引物是自己根据现有的序列设计的，也不知道好不好，但通过Blast比对显示跟大多数植物是可以跑的出来的。PS，我这个是跑的它的一个内含子。谢谢各位大神支支招吧！3Q
小博士叩谢大家！！！

求助：AT含量高的序列如何PCR？
LEAFY.gif
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顺其自然~~
1楼 2014-07-15 11:15:04
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-07-22 08:39:13
低GC比例的序列很用以PCR，你的阳性样品不是有目的带吗？
样品里没有目的模板自然就P不出来。
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2楼2014-07-21 17:34:41
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