应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 高GC模板含量的PCR扩增？
91/1返回列表
查看: 2493  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

sarah-miao

银虫 (正式写手)

[求助] 高GC模板含量的PCR扩增？ 已有1人参与

请教大家高GC模板含量的扩增？如何扩增，有哪家的酶比较好用，PCR过程中需要注意些什么事项，还望各位赐教！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-06-18 15:47:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-06-18 22:13:55
sarah-miao: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2014-06-19 08:01:58
1 建议用生工的：高GC含量模板PCR扩增试剂盒：
2 原因如下：
              PCR反应中有时由于引物或模板中GC含量过高导致双链变性及引物与模板退火困难，并且普通Taq DNAPolymerase在98℃的时候很容易就失活，从而导致PCR失败。生工针对高GC含量和复杂二级结构的模板设计的PCR buffer及HotTaq DNAPolymerase可增强反应的特异性及稳定性，从而获得好的实验结果。
3 影响因素：
               影响PCR反应的因素很多，如果发现PCR反应没有得到所需产物或条带较弱，建议用试剂盒中提供的25mmol/L MgCl2调节反应体系中的Mg2+浓度，以期获得更好的结果。
赞一下 回复此楼
人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
2楼2014-06-18 20:03:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sarah-miao

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-06-18 20:03:27
1 建议用生工的：高GC含量模板PCR扩增试剂盒：
2 原因如下：
              PCR反应中有时由于引物或模板中GC含量过高导致双链变性及引物与模板退火困难，并且普通Taq DNAPolymerase在98℃的时候很容易就失活，从 ...

ok,学习了，谢谢
回复此楼
3楼2014-06-19 08:01:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hutil1543

金虫 (小有名气)
我是用的宝生物的LAtaq酶，效果很好专门针对高GC含量模板的。
赞一下 回复此楼
4楼2014-06-23 09:25:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sarah-miao

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hutil1543 at 2014-06-23 09:25:59
我是用的宝生物的LAtaq酶，效果很好专门针对高GC含量模板的。

谢啦，会考虑尝试
回复此楼
5楼2014-06-24 12:33:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

北化方华

铁虫 (初入文坛)
可以加DMSO或者GCbuffer试试看。
赞一下 回复此楼
6楼2014-08-02 19:33:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)
加dmso可以降低tm值，提高扩增效率

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
7楼2014-08-02 20:12:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sarah-miao

银虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by bio_sci at 2014-08-02 20:12:01
加dmso可以降低tm值，提高扩增效率

直接加进去了，有什么比例可以推荐么，另外，DMSO那么大的毒性，实在抽风台加的吧
赞一下 回复此楼
8楼2014-08-04 09:04:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (小有名气)
本帖仅楼主可见
赞一下
9楼2016-02-25 22:54:04
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
相关版块跳转 我要订阅楼主 sarah-miao 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章 +17 rare12345 2026-03-18 17/850 2026-03-19 20:48 by yuncha
[考研] 307求调剂 +8 冷笙123 2026-03-17 8/400 2026-03-19 19:38 by maocaozhuxi
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +10 慕寒mio 2026-03-16 10/500 2026-03-19 15:26 by 丁丁*
[考研] 266求调剂 +5 阳阳哇塞 2026-03-14 10/500 2026-03-19 15:08 by 阳阳哇塞
[考研] 324分 085600材料化工求调剂 +3 llllkkkhh 2026-03-18 3/150 2026-03-19 14:22 by houyaoxu
[考研] 0703化学调剂 +5 pupcoco 2026-03-17 8/400 2026-03-19 13:58 by houyaoxu
[考研] 332求调剂 +3 ydfyh 2026-03-17 3/150 2026-03-19 10:14 by 功夫疯狂
[考研] 304求调剂 +6 司空. 2026-03-18 6/300 2026-03-18 23:03 by 星空星月
[考研] 材料专业求调剂 +5 hanamiko 2026-03-18 5/250 2026-03-18 20:19 by 星空星月
[考研] 一志愿西南交大，求调剂 +4 材化逐梦人 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:22 by 007_lilei
[考研] 070300化学319求调剂 +6 锦鲤0909 2026-03-17 6/300 2026-03-18 13:22 by Iveryant
[考研] 304求调剂 +12 小熊joy 2026-03-14 13/650 2026-03-18 12:34 by Linda Hu
[考博] 环境领域全国重点实验室招收博士1-2名 +3 QGZDSYS 2026-03-13 5/250 2026-03-18 11:13 by QGZDSYS
[考研] 278求调剂 +5 烟火先于春 2026-03-17 5/250 2026-03-18 08:43 by 星空星月
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 295求调剂 +3 小匕仔汁 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:17 by vgtyfty
[考博] 福州大学杨黄浩课题组招收2026年专业学位博士研究生，2026.03.20截止 +3 Xiangyu_ou 2026-03-12 3/150 2026-03-13 09:36 by duanwu655
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭