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sarah-miao

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[求助] 高GC模板含量的PCR扩增？已有1人参与

请教大家高GC模板含量的扩增？如何扩增，有哪家的酶比较好用，PCR过程中需要注意些什么事项，还望各位赐教！

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1楼 2014-06-18 15:47:20

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飞约疯人院

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科学怪人

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-06-18 22:13:55
sarah-miao: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2014-06-19 08:01:58

1 建议用生工的：高GC含量模板PCR扩增试剂盒：
2 原因如下：
PCR反应中有时由于引物或模板中GC含量过高导致双链变性及引物与模板退火困难，并且普通Taq DNAPolymerase在98℃的时候很容易就失活，从而导致PCR失败。生工针对高GC含量和复杂二级结构的模板设计的PCR buffer及HotTaq DNAPolymerase可增强反应的特异性及稳定性，从而获得好的实验结果。
3 影响因素：
影响PCR反应的因素很多，如果发现PCR反应没有得到所需产物或条带较弱，建议用试剂盒中提供的25mmol/L MgCl2调节反应体系中的Mg2+浓度，以期获得更好的结果。

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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。

2楼2014-06-18 20:03:27

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sarah-miao

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2楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-06-18 20:03:27
1 建议用生工的：高GC含量模板PCR扩增试剂盒：
2 原因如下：
PCR反应中有时由于引物或模板中GC含量过高导致双链变性及引物与模板退火困难，并且普通Taq DNAPolymerase在98℃的时候很容易就失活，从 ...

ok,学习了，谢谢