24小时热门版块排行榜    

查看: 2500  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

sarah-miao

银虫 (正式写手)

[求助] 高GC模板含量的PCR扩增? 已有1人参与

请教大家高GC模板含量的扩增?如何扩增,有哪家的酶比较好用,PCR过程中需要注意些什么事项,还望各位赐教!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sarah-miao

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-06-18 20:03:27
1 建议用生工的:高GC含量模板PCR扩增试剂盒:
2 原因如下:
              PCR反应中有时由于引物或模板中GC含量过高导致双链变性及引物与模板退火困难,并且普通Taq DNAPolymerase在98℃的时候很容易就失活,从 ...

ok,学习了,谢谢
3楼2014-06-19 08:01:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流! 2014-06-18 22:13:55
sarah-miao: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2014-06-19 08:01:58
1 建议用生工的:高GC含量模板PCR扩增试剂盒:
2 原因如下:
              PCR反应中有时由于引物或模板中GC含量过高导致双链变性及引物与模板退火困难,并且普通Taq DNAPolymerase在98℃的时候很容易就失活,从而导致PCR失败。生工针对高GC含量和复杂二级结构的模板设计的PCR buffer及HotTaq DNAPolymerase可增强反应的特异性及稳定性,从而获得好的实验结果。
3 影响因素:
               影响PCR反应的因素很多,如果发现PCR反应没有得到所需产物或条带较弱,建议用试剂盒中提供的25mmol/L MgCl2调节反应体系中的Mg2+浓度,以期获得更好的结果。
人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
2楼2014-06-18 20:03:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hutil1543

金虫 (小有名气)

我是用的宝生物的LAtaq酶,效果很好专门针对高GC含量模板的。
4楼2014-06-23 09:25:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sarah-miao

银虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by hutil1543 at 2014-06-23 09:25:59
我是用的宝生物的LAtaq酶,效果很好专门针对高GC含量模板的。

谢啦,会考虑尝试
5楼2014-06-24 12:33:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿吉林大学材料学硕321求调剂 +9 Ymlll 2026-03-18 12/600 2026-03-20 00:01 by 23Postgrad
[考研] 286分人工智能专业请求调剂愿意跨考! +3 lemonzzn 2026-03-17 3/150 2026-03-19 23:58 by 23Postgrad
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +8 zlingli 2026-03-13 8/400 2026-03-19 16:32 by 轻松不少随
[考研] 化学求调剂 +3 临泽境llllll 2026-03-17 4/200 2026-03-19 13:59 by houyaoxu
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +7 小材化本科 2026-03-18 7/350 2026-03-19 10:46 by Linda Hu
[考研] 304求调剂 +6 司空. 2026-03-18 6/300 2026-03-18 23:03 by 星空星月
[考研] 一志愿华中科技大学,080502,354分求调剂 +4 守候夕阳CF 2026-03-18 4/200 2026-03-18 22:16 by li123456789.
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂(0854都可以) +3 xbxudjdn 2026-03-18 3/150 2026-03-18 22:14 by zhq0425
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +7 手机用户 2026-03-17 7/350 2026-03-18 14:34 by vgtyfty
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
[考研] 考研调剂 +3 淇ya_~ 2026-03-17 5/250 2026-03-17 09:25 by Winj1e
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
[考研] 326求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-15 3/150 2026-03-16 07:33 by Iveryant
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[考研] 304求调剂 +7 7712b 2026-03-13 7/350 2026-03-13 21:42 by peike
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见