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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 高GC模板含量的PCR扩增？
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

[求助] 高GC模板含量的PCR扩增？ 已有1人参与

请教大家高GC模板含量的扩增？如何扩增，有哪家的酶比较好用，PCR过程中需要注意些什么事项，还望各位赐教！
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1楼 2014-06-18 15:47:20
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-06-18 22:13:55
sarah-miao: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2014-06-19 08:01:58
1 建议用生工的：高GC含量模板PCR扩增试剂盒：
2 原因如下：
              PCR反应中有时由于引物或模板中GC含量过高导致双链变性及引物与模板退火困难，并且普通Taq DNAPolymerase在98℃的时候很容易就失活，从而导致PCR失败。生工针对高GC含量和复杂二级结构的模板设计的PCR buffer及HotTaq DNAPolymerase可增强反应的特异性及稳定性，从而获得好的实验结果。
3 影响因素：
               影响PCR反应的因素很多，如果发现PCR反应没有得到所需产物或条带较弱，建议用试剂盒中提供的25mmol/L MgCl2调节反应体系中的Mg2+浓度，以期获得更好的结果。
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
2楼2014-06-18 20:03:27
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sarah-miao

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-06-18 20:03:27
1 建议用生工的：高GC含量模板PCR扩增试剂盒：
2 原因如下：
              PCR反应中有时由于引物或模板中GC含量过高导致双链变性及引物与模板退火困难，并且普通Taq DNAPolymerase在98℃的时候很容易就失活，从 ...

ok,学习了，谢谢
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3楼2014-06-19 08:01:49
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hutil1543

金虫 (小有名气)
我是用的宝生物的LAtaq酶，效果很好专门针对高GC含量模板的。
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4楼2014-06-23 09:25:59
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sarah-miao

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hutil1543 at 2014-06-23 09:25:59
我是用的宝生物的LAtaq酶，效果很好专门针对高GC含量模板的。

谢啦，会考虑尝试
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5楼2014-06-24 12:33:54
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北化方华

铁虫 (初入文坛)
可以加DMSO或者GCbuffer试试看。
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6楼2014-08-02 19:33:05
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bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)
加dmso可以降低tm值，提高扩增效率

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7楼2014-08-02 20:12:01
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sarah-miao

银虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by bio_sci at 2014-08-02 20:12:01
加dmso可以降低tm值，提高扩增效率

直接加进去了，有什么比例可以推荐么，另外，DMSO那么大的毒性，实在抽风台加的吧
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8楼2014-08-04 09:04:13
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匿名

用户注销 (小有名气)
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9楼2016-02-25 22:54:04
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