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nakamori0319

金虫 (小有名气)

[求助] 关于发酵罐染菌,求助

我做的菌种发酵周期较长,长得比较慢,发酵周期差不多140 h。在上发酵罐的时候发现,每一罐都在三天左右染菌。做了空白罐(不接种,不取样),同样染菌。感觉应该不是发酵罐密封性的原因吧,毕竟罐子那么贵。。。好无助,求大家帮忙分析一下原因。。。
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高高的帐篷

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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nakamori0319: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-07-14 17:23:44
dllchina: 金币+1, 鼓励积极应助 2014-07-15 10:13:25
染菌根据我的经验可能会有以下几个原因:1、灭菌不彻底,培养基或者罐体灭菌时间不足;2、空气滤膜损坏,曝气染菌;3、取样操作不标准;4、补料罐、消泡剂染菌;5、种子染菌
      其中原因2可能与你遇到的问题有关,我之前有一批发酵,发酵前期没有问题,到中期杂菌飞速繁殖,直接就废了,仔细排查原因,最后更换了空气滤膜后解决了问题
      你说的发酵3天开始染菌,可能原因还是很多的,空气中有杂菌是一个,还有可能是种子制备不纯,对数期由于你的菌种繁殖较快,杂菌长不起来,而进入到稳定期后杂菌开始大量繁殖,然后就悲剧了·······
13楼2014-07-14 16:21:03
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xuyunjian

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by nakamori0319 at 2014-07-13 23:04:05
培养基中含有2.5g/L的磷酸氢二钾和2.5的磷酸二氢钾,1的氯化镁和1的氯化钙,灭菌前是澄清的,但是灭菌后就有很多沉淀了,有沉淀会不会造成灭菌不彻底呢?如果灭菌不彻底的话,会在60h才染菌么?非常感谢您的帮助啊...

因为在发酵初期,染菌不是优势菌,生长滞后缓慢,也就是生长初期;达到一定程度后进入对数生长期,染菌情况迅速能看到。
相信自己,永不言弃
5楼2014-07-14 07:59:22
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发酵生命

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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nakamori0319: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-07-14 15:54:58
贵不代表罐子没问题,空白染菌,肯定要从菌种和接种操作以外的部分分析,空气系统、罐体、阀门,可以拆开检查,做验漏
人无远虑,必有近忧
9楼2014-07-14 11:26:35
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普通回帖

xuyunjian

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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nakamori0319: 金币+5 2014-07-14 10:51:40
会不会是您的培养基灭菌不彻底,可能是该原因。从您的描述来看,条件是一样的,唯一不同是接种,但若是染菌时间是一样,那就可能是您的大型发酵罐体的灭菌设施存在问题,致使未按要求达到灭菌效果
相信自己,永不言弃
2楼2014-07-13 22:31:45
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nakamori0319

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xuyunjian at 2014-07-13 22:31:45
会不会是您的培养基灭菌不彻底,可能是该原因。从您的描述来看,条件是一样的,唯一不同是接种,但若是染菌时间是一样,那就可能是您的大型发酵罐体的灭菌设施存在问题,致使未按要求达到灭菌效果

培养基中含有2.5g/L的磷酸氢二钾和2.5的磷酸二氢钾,1的氯化镁和1的氯化钙,灭菌前是澄清的,但是灭菌后就有很多沉淀了,有沉淀会不会造成灭菌不彻底呢?如果灭菌不彻底的话,会在60h才染菌么?非常感谢您的帮助啊
3楼2014-07-13 23:04:05
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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nakamori0319: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-07-14 10:51:56
引用回帖:
3楼: Originally posted by nakamori0319 at 2014-07-13 23:04:05
培养基中含有2.5g/L的磷酸氢二钾和2.5的磷酸二氢钾,1的氯化镁和1的氯化钙,灭菌前是澄清的,但是灭菌后就有很多沉淀了,有沉淀会不会造成灭菌不彻底呢?如果灭菌不彻底的话,会在60h才染菌么?非常感谢您的帮助啊...

灭菌后有沉淀是正常的,磷酸钙微溶。
不接种也会染菌,那肯定是发酵罐的问题了。
先主要检查3个方面:
1. 一定要先空消,然后再实消。灭菌过程中注意下发酵罐的气压和温度。
2. 检查一下夹套是否漏水。
3. 检查所有气芯,接口。特别是通气口气塞。

同时对整个发酵过程,每2小时取样仔细进行镜检,确定染菌时间,对情况分析会有较大帮助。

你的这种情况,很是常见。因为在发酵初期,染菌不是优势菌,生长滞后缓慢,也就是生长初期;达到一定程度后进入对数生长期,染菌情况迅速能看到。
4楼2014-07-13 23:55:11
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姜伦1989

新虫 (初入文坛)

两种可能,一是检查空气中是带菌,二是严格检查发酵罐密封性,各个阀门,视镜,罐口 等等
6楼2014-07-14 10:03:17
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bell_yong

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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nakamori0319: 金币+2 2014-07-14 10:52:40
谢谢!!!可以运用鱼骨图方法进行分析,人员操作的问题、物料的问题、设备的问题、环境的问题、逐一进行排查、排除。找出究竟是什么原因造成的问题。
7楼2014-07-14 10:29:04
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loasers

金虫 (小有名气)

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nakamori0319: 金币+4 2014-07-14 15:53:51
空气的原因较大,建议楼主对空气做下无菌检测。
Let life be beautifu llike summer flowers and death like autumn leaves
8楼2014-07-14 11:19:33
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swana

新虫 (小有名气)

再贵也可能漏气啊LZ~好好检查一下啦。祝你好运。
霁月难逢彩云易散
10楼2014-07-14 14:06:26
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