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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 关于发酵罐染菌，求助
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nakamori0319

金虫 (小有名气)

[求助] 关于发酵罐染菌，求助

我做的菌种发酵周期较长，长得比较慢，发酵周期差不多140 h。在上发酵罐的时候发现，每一罐都在三天左右染菌。做了空白罐(不接种，不取样)，同样染菌。感觉应该不是发酵罐密封性的原因吧，毕竟罐子那么贵。。。好无助，求大家帮忙分析一下原因。。。
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1楼 2014-07-13 21:51:39
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高高的帐篷

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
nakamori0319: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-07-14 17:23:44
dllchina: 金币+1, 鼓励积极应助 2014-07-15 10:13:25
染菌根据我的经验可能会有以下几个原因：1、灭菌不彻底，培养基或者罐体灭菌时间不足；2、空气滤膜损坏，曝气染菌；3、取样操作不标准；4、补料罐、消泡剂染菌；5、种子染菌
      其中原因2可能与你遇到的问题有关，我之前有一批发酵，发酵前期没有问题，到中期杂菌飞速繁殖，直接就废了，仔细排查原因，最后更换了空气滤膜后解决了问题
      你说的发酵3天开始染菌，可能原因还是很多的，空气中有杂菌是一个，还有可能是种子制备不纯，对数期由于你的菌种繁殖较快，杂菌长不起来，而进入到稳定期后杂菌开始大量繁殖，然后就悲剧了·······
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13楼2014-07-14 16:21:03
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xuyunjian

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
nakamori0319: 金币+5 2014-07-14 10:51:40
会不会是您的培养基灭菌不彻底，可能是该原因。从您的描述来看，条件是一样的，唯一不同是接种，但若是染菌时间是一样，那就可能是您的大型发酵罐体的灭菌设施存在问题，致使未按要求达到灭菌效果
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相信自己，永不言弃
2楼2014-07-13 22:31:45
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nakamori0319

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xuyunjian at 2014-07-13 22:31:45
会不会是您的培养基灭菌不彻底，可能是该原因。从您的描述来看，条件是一样的，唯一不同是接种，但若是染菌时间是一样，那就可能是您的大型发酵罐体的灭菌设施存在问题，致使未按要求达到灭菌效果

培养基中含有2.5g/L的磷酸氢二钾和2.5的磷酸二氢钾，1的氯化镁和1的氯化钙，灭菌前是澄清的，但是灭菌后就有很多沉淀了，有沉淀会不会造成灭菌不彻底呢？如果灭菌不彻底的话，会在60h才染菌么？非常感谢您的帮助啊
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3楼2014-07-13 23:04:05
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
nakamori0319: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-07-14 10:51:56
引用回帖:
3楼: Originally posted by nakamori0319 at 2014-07-13 23:04:05
培养基中含有2.5g/L的磷酸氢二钾和2.5的磷酸二氢钾，1的氯化镁和1的氯化钙，灭菌前是澄清的，但是灭菌后就有很多沉淀了，有沉淀会不会造成灭菌不彻底呢？如果灭菌不彻底的话，会在60h才染菌么？非常感谢您的帮助啊...

灭菌后有沉淀是正常的，磷酸钙微溶。
不接种也会染菌，那肯定是发酵罐的问题了。
先主要检查3个方面：
1. 一定要先空消，然后再实消。灭菌过程中注意下发酵罐的气压和温度。
2. 检查一下夹套是否漏水。
3. 检查所有气芯，接口。特别是通气口气塞。

同时对整个发酵过程，每2小时取样仔细进行镜检，确定染菌时间，对情况分析会有较大帮助。

你的这种情况，很是常见。因为在发酵初期，染菌不是优势菌，生长滞后缓慢，也就是生长初期；达到一定程度后进入对数生长期，染菌情况迅速能看到。
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4楼2014-07-13 23:55:11
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