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anruoka

木虫 (正式写手)

[求助] 求助:10吨发酵罐培养大肠杆菌OD下降问题 已有5人参与

10吨发酵罐 生产用菌种 大肠杆菌 最近一个月突然出现一个问题:菌种长到一定阶段,有时候是加补料之前,有时候是之后。半个小时到一个小时时间内OD600,很快降到1以下,在OD下降之前,通常DO上升,泡沫很多,很粘稠。做双层板没有噬菌斑,偶尔培养两天以后部分菌落中心有空白,菌落呈圆环庄,不是噬菌斑那种透明圈。奇怪的是,发酵液OD已经很低了,拿过来用LB摇瓶还能长起来。找不到是什么原因,无聊、压缩空气什么的都排查过,还是解决不了,几乎每一罐都要挂掉。
求助:10吨发酵罐培养大肠杆菌OD下降问题
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求助:10吨发酵罐培养大肠杆菌OD下降问题-1
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我是一只好虫子
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hkfgwww

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

一看到你的描述就知道是噬菌体感染,都不需要找别的原因了。
微生物发酵
9楼2013-06-01 19:08:03
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damaomao

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

11楼2013-06-02 10:45:39
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wangju87c

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我在100升罐上也遇上过这样的情况,可以说是遇上了三罐都是这样的,我们把发酵罐大卸八块,所有能泡的金属部件,垫圈都在碱水中泡了24小时,更换所有空气过滤器,罐子也是碱水泡,空消实消,现在按照一样的工艺,试了好几罐,有点问题都没有。所以说,肯定是有杂菌污染,可能是温和噬菌体,λ噬菌体之类的,肯定不是工艺的问题
哥已婚
19楼2014-05-27 14:13:53
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普通回帖

志子

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
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laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励交流! 2013-05-27 08:19:26
是否罐压过高,压力升高导致CO2溶解度上升得比氧的快。而发酵液中CO2浓度过高,会影响代谢,可能会毒害细胞。
但是看你平板,,,,如果是噬菌体污染,建议实验把菌种和培养基都换了小试一下看。
2楼2013-05-26 01:51:41
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anruoka

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 志子 at 2013-05-26 01:51:41
是否罐压过高,压力升高导致CO2溶解度上升得比氧的快。而发酵液中CO2浓度过高,会影响代谢,可能会毒害细胞。
但是看你平板,,,,如果是噬菌体污染,建议实验把菌种和培养基都换了小试一下看。

罐压很低,培养基和发酵工艺都是确定的,做了很多年了
我是一只好虫子
3楼2013-05-26 11:24:01
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小花木兰

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励交流! 2013-05-27 08:19:36
培养基组成有关的,影响很大,还有补料也有关系
4楼2013-05-26 20:42:40
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anruoka

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 小花木兰 at 2013-05-26 20:42:40
培养基组成有关的,影响很大,还有补料也有关系

还是太泛泛~~
我是一只好虫子
5楼2013-05-27 09:17:04
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yuanjun0106

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
“在OD下降之前,通常DO上升,泡沫很多”
DO值上升:是否意味细菌开始大量死亡,导致需氧量下降?
你的菌种是每罐开启一支还是横传上一罐的菌种?
如果培养条件一直未变而出现现在的状况,可能要对菌种进行鉴定,看菌种是否出现污染。
6楼2013-05-27 11:38:08
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fushxmy

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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我出现过和你一样的情况,就是phage感染,多杀菌消毒。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
秦皇汉武
7楼2013-05-28 06:34:40
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chshen06188

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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较大可能是噬菌体污染,双层平板做不出要考虑实际操作原因。
检查罐体各个系统的设备和管件是否有渗漏,包括但不限于:空气、补料、移种、液氨。
注意做好车间通风、清洁,严格控制活菌体排放。
竹杖芒鞋轻胜马,一蓑风雨任平生。
8楼2013-05-28 08:21:41
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anruoka

木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by hkfgwww at 2013-06-01 19:08:03
一看到你的描述就知道是噬菌体感染,都不需要找别的原因了。

那为什么分离不出来~~
我是一只好虫子
10楼2013-06-02 07:54:40
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