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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 求助：10吨发酵罐培养大肠杆菌OD下降问题
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anruoka

木虫 (正式写手)

[求助] 求助：10吨发酵罐培养大肠杆菌OD下降问题 已有5人参与

10吨发酵罐 生产用菌种 大肠杆菌 最近一个月突然出现一个问题：菌种长到一定阶段，有时候是加补料之前，有时候是之后。半个小时到一个小时时间内OD600，很快降到1以下，在OD下降之前，通常DO上升，泡沫很多，很粘稠。做双层板没有噬菌斑，偶尔培养两天以后部分菌落中心有空白，菌落呈圆环庄，不是噬菌斑那种透明圈。奇怪的是，发酵液OD已经很低了，拿过来用LB摇瓶还能长起来。找不到是什么原因，无聊、压缩空气什么的都排查过，还是解决不了，几乎每一罐都要挂掉。
求助：10吨发酵罐培养大肠杆菌OD下降问题
QQ图片20130522222011.jpg


求助：10吨发酵罐培养大肠杆菌OD下降问题-1
QQ图片20130522222502.jpg
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我是一只好虫子
1楼 2013-05-25 21:57:05
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

hkfgwww

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

一看到你的描述就知道是噬菌体感染，都不需要找别的原因了。
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微生物发酵
9楼2013-06-01 19:08:03
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damaomao

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
11楼2013-06-02 10:45:39
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wangju87c

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我在100升罐上也遇上过这样的情况，可以说是遇上了三罐都是这样的，我们把发酵罐大卸八块，所有能泡的金属部件，垫圈都在碱水中泡了24小时，更换所有空气过滤器，罐子也是碱水泡，空消实消，现在按照一样的工艺，试了好几罐，有点问题都没有。所以说，肯定是有杂菌污染，可能是温和噬菌体，λ噬菌体之类的，肯定不是工艺的问题
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哥已婚
19楼2014-05-27 14:13:53
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普通回帖

志子

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-05-27 08:19:26
是否罐压过高，压力升高导致CO2溶解度上升得比氧的快。而发酵液中CO2浓度过高，会影响代谢，可能会毒害细胞。
但是看你平板，，，，如果是噬菌体污染，建议实验把菌种和培养基都换了小试一下看。
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2楼2013-05-26 01:51:41
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anruoka

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 志子 at 2013-05-26 01:51:41
是否罐压过高，压力升高导致CO2溶解度上升得比氧的快。而发酵液中CO2浓度过高，会影响代谢，可能会毒害细胞。
但是看你平板，，，，如果是噬菌体污染，建议实验把菌种和培养基都换了小试一下看。

罐压很低，培养基和发酵工艺都是确定的，做了很多年了
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我是一只好虫子
3楼2013-05-26 11:24:01
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小花木兰

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-05-27 08:19:36
培养基组成有关的，影响很大，还有补料也有关系
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4楼2013-05-26 20:42:40
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anruoka

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小花木兰 at 2013-05-26 20:42:40
培养基组成有关的，影响很大，还有补料也有关系

还是太泛泛~~
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我是一只好虫子
5楼2013-05-27 09:17:04
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yuanjun0106

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
“在OD下降之前，通常DO上升，泡沫很多”
DO值上升：是否意味细菌开始大量死亡，导致需氧量下降？
你的菌种是每罐开启一支还是横传上一罐的菌种？
如果培养条件一直未变而出现现在的状况，可能要对菌种进行鉴定，看菌种是否出现污染。
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悟
6楼2013-05-27 11:38:08
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fushxmy

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我出现过和你一样的情况，就是phage感染，多杀菌消毒。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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秦皇汉武
7楼2013-05-28 06:34:40
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chshen06188

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
较大可能是噬菌体污染，双层平板做不出要考虑实际操作原因。
检查罐体各个系统的设备和管件是否有渗漏，包括但不限于：空气、补料、移种、液氨。
注意做好车间通风、清洁，严格控制活菌体排放。
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竹杖芒鞋轻胜马，一蓑风雨任平生。
8楼2013-05-28 08:21:41
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anruoka

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by hkfgwww at 2013-06-01 19:08:03
一看到你的描述就知道是噬菌体感染，都不需要找别的原因了。

那为什么分离不出来~~
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我是一只好虫子
10楼2013-06-02 07:54:40
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