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lanhuaorchid金虫 (著名写手)
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50L的发酵罐，发酵高手请进，帮忙，回答的越详细越好，非常感谢 已有4人参与
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50L的发酵罐，发酵高手请进，帮忙，回答的越详细越好，非常感谢 1个新的50L的发酵罐即将投入使用，用于大肠杆菌培养，请高手指点： 1、 需要准备多大的补料瓶、酸碱瓶之类的附属装置？ 2、 一般大家平时用的调节pH的酸碱，一般用什么，浓度是多少，怎么灭菌？ 3、 养重组大肠杆菌，常用的消泡剂是什么，用量多少？ 4、 都用LB培养么，有什么专用高密度发酵的培养基么？碳源用的葡萄糖还是甘油？ 5、一般发酵过程泵会设置什么偶联？溶氧、转速会保持在多少？ |
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wentanbaodao
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看到MM上罐，上来发表一下，因为我也马上要上个做大肠的罐。 1 需要准备多大的补料瓶、酸碱瓶之类的附属装置？ 答：这个真的不一定，按你装料30L来算的话，你初始培养基应该在18～20L，补料瓶应该在1、2L左右。但是看你流加的速度和物料了，不一样。反正我做的实验，2L足够了。酸碱瓶是必备的，不过一般没有补酸的。 2 一般大家平时用的调节pH的酸碱，一般用什么，浓度是多少，怎么灭菌？ 我没有调过酸，所以这一点不回答。碱是用的氨水，没有浓度，只是把补料瓶空消，把氨水直接倒进去就行。这是实验室，生产上氨水就得滤膜过一下了。 3 养重组大肠杆菌，常用的消泡剂是什么，用量多少？ 消泡肯定是用泡敌，只不过尽量不加是不加，少量多次吧，可以放点油在补料管中。 4 都用LB培养么，有什么专用高密度发酵的培养基么？碳源用的葡萄糖还是甘油？ 种子用LB，但是发酵培养基还是较为复杂的，起码加了不少的无机盐成分，不能一概而论的。碳源葡萄糖和甘油都有用的，看你的产品是什么。 5.一般发酵过程泵会设置什么偶联？溶氧、转速会保持在多少？ 设置转速与溶氧耦联，溶氧在30%以上，转速看罐的大小，你50L的罐，至少也要保持在100以上 |
5楼2013-08-26 16:26:47
【答案】应助回帖
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你这个也问得太细了，真懂的也不会告诉你的，这是人家的机密，再说就算告诉你也没用，不同的菌种发酵条件大相径庭。 1. 一般补料瓶（含料液和导流管）都是在灭菌锅里灭菌，头用报纸之类的东西报上。 2. pH一般用氢氧化钾溶液调。不知道你的菌使用酸液还是碱液。灭菌同上。 3. 消泡剂种类很多，聚醚类的、也有用烃类、油类的。 4.一般中式的培养基和摇瓶的培养基成分不同。LB应该也可以中式。这个你再查查资料。 5.溶氧和转速根据菌而定。我们这边也是细菌，转速100.溶氧90多。 |
2楼2013-08-26 11:15:02
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【答案】应助回帖
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楼主的问题很笼统呀 所以估计没人能给你一个非常确定的答案 只能给你一些大面上的经验，跟你的实验不保证完全吻合 1，如果补料的东西不太贵的话，多点剩下也没关系，所以宁多勿少 2，通常来说E.coli发酵过程中pH会下降，但是这也要看你发酵过程中的要求；比如你要控pH到6，那么就不需要补酸了，只加一个碱瓶就可；只要挥发性不太大，直接用灭菌锅灭菌就可以，不过从我们之前做的来看酸碱浓度配得大一点，不灭菌也没问题 3，我们实验室消泡剂初始万分之四（体积），然后手动补加 4，看你做的东西了 5，可以不偶联，因为你不需要计算搅拌能耗、供气能耗，而且E.coli不像酵母，个头比较小，搅拌的剪切力对E.coli损伤可以忽略，搅拌大一点没关系。不过要注意搅拌越快，泡沫越多。 |
6楼2013-08-26 22:54:30
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