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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 50L的发酵罐，发酵高手请进，帮忙，回答的越详细越好，非常感谢
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lanhuaorchid

金虫 (著名写手)

orchid

[求助] 50L的发酵罐，发酵高手请进，帮忙，回答的越详细越好，非常感谢 已有4人参与

50L的发酵罐，发酵高手请进，帮忙，回答的越详细越好，非常感谢
1个新的50L的发酵罐即将投入使用，用于大肠杆菌培养，请高手指点：
1、        需要准备多大的补料瓶、酸碱瓶之类的附属装置？
2、        一般大家平时用的调节pH的酸碱，一般用什么，浓度是多少，怎么灭菌？
3、        养重组大肠杆菌，常用的消泡剂是什么，用量多少？
4、        都用LB培养么，有什么专用高密度发酵的培养基么？碳源用的葡萄糖还是甘油？
5、一般发酵过程泵会设置什么偶联？溶氧、转速会保持在多少？
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orchid
1楼 2013-08-26 10:41:54
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wentanbaodao

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+5, good！ 2013-08-26 17:55:06
lanhuaorchid: 金币+8, ★★★很有帮助, 谢谢你，学习中 2013-08-27 13:02:36
看到MM上罐，上来发表一下，因为我也马上要上个做大肠的罐。
1 需要准备多大的补料瓶、酸碱瓶之类的附属装置？
    答：这个真的不一定，按你装料30L来算的话，你初始培养基应该在18～20L，补料瓶应该在1、2L左右。但是看你流加的速度和物料了，不一样。反正我做的实验，2L足够了。酸碱瓶是必备的，不过一般没有补酸的。
2 一般大家平时用的调节pH的酸碱，一般用什么，浓度是多少，怎么灭菌？
  我没有调过酸，所以这一点不回答。碱是用的氨水，没有浓度，只是把补料瓶空消，把氨水直接倒进去就行。这是实验室，生产上氨水就得滤膜过一下了。
3 养重组大肠杆菌，常用的消泡剂是什么，用量多少？
  消泡肯定是用泡敌，只不过尽量不加是不加，少量多次吧，可以放点油在补料管中。
4 都用LB培养么，有什么专用高密度发酵的培养基么？碳源用的葡萄糖还是甘油？
  种子用LB，但是发酵培养基还是较为复杂的，起码加了不少的无机盐成分，不能一概而论的。碳源葡萄糖和甘油都有用的，看你的产品是什么。
5.一般发酵过程泵会设置什么偶联？溶氧、转速会保持在多少？
  设置转速与溶氧耦联，溶氧在30%以上，转速看罐的大小，你50L的罐，至少也要保持在100以上
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5楼2013-08-26 16:26:47
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任_强

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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laozuzunzhe: 金币+4, 鼓励热心应助！ 2013-08-26 17:54:14
lanhuaorchid(laozuzunzhe代发): 金币+3, 代发！ 2013-08-26 17:56:48
你这个也问得太细了，真懂的也不会告诉你的，这是人家的机密，再说就算告诉你也没用，不同的菌种发酵条件大相径庭。
1. 一般补料瓶（含料液和导流管）都是在灭菌锅里灭菌，头用报纸之类的东西报上。
2. pH一般用氢氧化钾溶液调。不知道你的菌使用酸液还是碱液。灭菌同上。
3. 消泡剂种类很多，聚醚类的、也有用烃类、油类的。
4.一般中式的培养基和摇瓶的培养基成分不同。LB应该也可以中式。这个你再查查资料。
5.溶氧和转速根据菌而定。我们这边也是细菌，转速100.溶氧90多。
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微生物行业的初学者，望大牛们不吝赐教
2楼2013-08-26 11:15:02
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普通回帖

lanhuaorchid

金虫 (著名写手)

orchid
引用回帖:
2楼: Originally posted by 任_强 at 2013-08-26 11:15:02
你这个也问得太细了，真懂的也不会告诉你的，这是人家的机密，再说就算告诉你也没用，不同的菌种发酵条件大相径庭。
1. 一般补料瓶（含料液和导流管）都是在灭菌锅里灭菌，头用报纸之类的东西报上。
2. pH一般用氢 ...

谢谢，我知道有些东西是机密，但有些东西还是可以交流的
1我看到说有些酸碱是不需灭菌的，直接倒到灭过菌的补料瓶中即可？
2一般消泡剂就是用泡敌、油类吧,大概用什么浓度呢？
3、发酵罐转速100，不低么?
谢谢
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orchid
3楼2013-08-26 13:35:26
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任_强

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
lanhuaorchid: 金币+2, ★有帮助, 谢谢 2013-09-02 08:27:48
1. 我们这边的酸碱是灭菌的。
2. 50L罐消泡剂加5滴。
3.我们的菌株不大好氧，转速低。你那个根据具体情况定
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微生物行业的初学者，望大牛们不吝赐教
4楼2013-08-26 15:07:47
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danlv

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lanhuaorchid: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢你，学习了 2013-08-27 13:03:24
楼主的问题很笼统呀 所以估计没人能给你一个非常确定的答案

只能给你一些大面上的经验，跟你的实验不保证完全吻合

1，如果补料的东西不太贵的话，多点剩下也没关系，所以宁多勿少
2，通常来说E.coli发酵过程中pH会下降，但是这也要看你发酵过程中的要求；比如你要控pH到6，那么就不需要补酸了，只加一个碱瓶就可；只要挥发性不太大，直接用灭菌锅灭菌就可以，不过从我们之前做的来看酸碱浓度配得大一点，不灭菌也没问题
3，我们实验室消泡剂初始万分之四（体积），然后手动补加
4，看你做的东西了
5，可以不偶联，因为你不需要计算搅拌能耗、供气能耗，而且E.coli不像酵母，个头比较小，搅拌的剪切力对E.coli损伤可以忽略，搅拌大一点没关系。不过要注意搅拌越快，泡沫越多。
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6楼2013-08-26 22:54:30
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lanhuaorchid

金虫 (著名写手)

orchid
引用回帖:
5楼: Originally posted by wentanbaodao at 2013-08-26 16:26:47
看到MM上罐，上来发表一下，因为我也马上要上个做大肠的罐。
1 需要准备多大的补料瓶、酸碱瓶之类的附属装置？
    答：这个真的不一定，按你装料30L来算的话，你初始培养基应该在18～20L，补料瓶应该在1、2L左右 ...

还有个问题，请教一下，我们一般摇瓶培养（3L瓶子装液1.2L）是第一天下午接种，晚上加诱导剂过夜培养，第二天早上收菌，那罐子上一般要养多久呀？谢谢
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orchid
7楼2013-08-27 15:30:50
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lanhuaorchid

金虫 (著名写手)

orchid
引用回帖:
5楼: Originally posted by wentanbaodao at 2013-08-26 16:26:47
看到MM上罐，上来发表一下，因为我也马上要上个做大肠的罐。
1 需要准备多大的补料瓶、酸碱瓶之类的附属装置？
    答：这个真的不一定，按你装料30L来算的话，你初始培养基应该在18～20L，补料瓶应该在1、2L左右 ...

还有
1、使用的泡敌需要稀释么，“放点油在补料管中”是指用豆油之类的做消泡剂么？
2、碳源葡萄糖和甘油都有用的，看你的产品是什么，什么情况下用葡萄糖，什么时候用甘油呢，用葡萄糖的时候需要流加吧？
谢谢
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orchid
8楼2013-08-27 15:36:21
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wentanbaodao

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by lanhuaorchid at 2013-08-27 15:30:50
还有个问题，请教一下，我们一般摇瓶培养（3L瓶子装液1.2L）是第一天下午接种，晚上加诱导剂过夜培养，第二天早上收菌，那罐子上一般要养多久呀？谢谢...

一般情况下，诱导前生长时间为6H左右吧，这个跟你瓶上应该差不多，早上再收集也就是12h左右，这个时间感觉有点短，也不一定，得看你在罐上的产量了，可以试一下再调节
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9楼2013-08-28 13:37:14
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wentanbaodao

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by lanhuaorchid at 2013-08-27 15:36:21
还有
1、使用的泡敌需要稀释么，“放点油在补料管中”是指用豆油之类的做消泡剂么？
2、碳源葡萄糖和甘油都有用的，看你的产品是什么，什么情况下用葡萄糖，什么时候用甘油呢，用葡萄糖的时候需要流加吧？
谢谢...

1.是在你觉得泡敌会影响产量的前提下，豆油一类的产品也是可以作消泡的。泡敌肯定是要稀释的，稀释倍数也没什么定量，我一般是1：2
2.什么时候用葡萄糖，什么时候用甘油，这个我可真不知道，得看你的菌利用什么较好，补什么都需要流加
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10楼2013-08-28 13:38:44
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