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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 求助关于发酵罐染菌
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dqf256196

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助关于发酵罐染菌 已有1人参与

问题描述：15L发酵罐染菌  即使单纯的培养基灭菌后，没有任何其他操作，跑空白也会染菌
   1.灭菌之前保压实验24h 2公斤压力降至1公斤 设备验漏找不到泄露的部位，即便如此按照厂家的说明书，保压是合格的（厂家的标准是1h内降低不超过0.01公斤）

  2.滤芯是新的，赛多利斯，使用之前验过符合标准（泡点实验）补充曾更换两次新的滤芯，依然染菌。

  3.灭菌后在未通入空气前取样于摇瓶中，培养之未见染菌
  已做过7~8罐，情况类似，都在运行一天后染菌现象开始显现，实在找不到原因了，各位有什么建设性意见，指导一下，先行谢过
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1楼 2013-01-04 23:19:19
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回帖置顶 ( 共有1个 )

jingg1990

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
scelab: 金币+5, MicEPI+1, 谢谢交流 2013-03-05 13:22:20
首先看染菌菌型是否多变或是多个菌型，如果多变或是多个菌型，空气系统、渗漏、降温系统、补料系统、搅拌密封等多加检查，如果单一菌型，优先考虑罐内有死角，这个要从罐内的设施来判断，尤其是罐内有无设计或制作过程中产生的夹层或空心部分，也可以在罐内加满水，按实消操作加温煮沸，两小时后升温至126－128度，维持两个小时，关进排气阀闷罐，第二天重复操作，第三天放水后接着进培养基消毒空白培养，看是否染菌或染菌开始时间有无延长，即可判断是否死角的问题。
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27楼2013-03-05 13:19:47
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zch79214

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励应助 2013-01-06 22:47:42
一.跑空都染菌，肯定不是菌种问题；
二  应该是发酵罐的问题：
   建议1 检查设备渗漏，
       2 实消后别通气，如果染菌，那就是管道问题。（管道渗漏导致染菌）
       3 实消后未通气，也为染菌，反之通气，如果染菌肯定就是通气系统问题。
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13楼2013-01-05 17:41:52
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普通回帖

tianhome

木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-01-05 18:56:15
非常理解你的痛苦，建议不接种运行一下，要有培养基。如果不染菌，说明种子有问题，如果染菌说明灭菌或通气系统有问题。
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虫洞
2楼2013-01-05 03:38:57
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励应助 2013-01-06 22:47:50
是污染了什么菌呢？如果能排除种子的问题，有时候发酵罐生锈的地方容易藏菌，可以把发酵罐不发培养基高压空灭一次；如果还不保险就按除芽孢的方法试试。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2013-01-05 08:06:47
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oldflying

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2013-02-28 23:42:56
两种可能：1、种子已经被污染了；2、发酵罐的通气管道被污染了。可以加入培养基但不接种验证一下。
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一个人的努力和坚持！
4楼2013-01-05 08:34:06
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amaoni

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励应助 2013-01-06 22:47:58
"灭菌之前保压实验24h 2公斤压力降至1公斤 设备验漏找不到泄露的部位，即便如此按照厂家的说明书，保压是合格的（厂家的标准是1h内降低不超过0.01公斤）"?
一天以后开始染菌，应该不会是过滤空气的问题，若培养基也染菌的话，不是种液的问题，应该是发酵罐的原因。
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5楼2013-01-05 08:39:30
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dqf256196

新虫 (初入文坛)
我们也怀疑是发酵管的原因，可是找不到具体的点，依旧是解决不了 。
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6楼2013-01-05 09:14:07
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dqf256196

新虫 (初入文坛)
问题描述：15L发酵罐染菌  即使单纯的培养基灭菌后，没有任何其他操作，跑空白也会染菌
  问题描述已经讲只是灭菌培养基，跑空白 没有任何其他操作   但是依然谢谢各位的热心
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7楼2013-01-05 09:17:59
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love2412

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励应助 2013-01-06 22:48:05
跑空白染菌问题很可能出在发酵罐上。检查下各个阀门动作是否正常。排空管路不畅（尤其是在线灭菌后）容易造成液、气倒灌，甚至反向冲开滤芯，造成污染。
另外染的是芽孢吗？发酵罐管路环境比较恶劣，芽孢菌相对易存活。
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8楼2013-01-05 09:48:58
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dqf256196

新虫 (初入文坛)
那个有单向阀 再者 更换新的滤芯都没有解决问题，染得菌不晓得是什么菌，反正每次从菌落表观来看和相似
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9楼2013-01-05 10:02:09
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zhangxingc

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励应助 2013-01-06 22:48:12
建议将发酵罐拆开，彻底清洗一遍，尤其是密封圈等连接处，然后再空消－－实消－－空白培养。

如果还是污染，建议将杂菌进行鉴定，再分析原因
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IwanttoaccompanyyoumorethanyouknowbutIcann't
10楼2013-01-05 10:39:04
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