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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 做灰色链霉菌摇瓶发酵时，老是染菌.。求助啦
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东走西顾10

新虫 (初入文坛)

[求助] 做灰色链霉菌摇瓶发酵时，老是染菌.。求助啦

种子液镜检没发现其他菌，接入发酵瓶，两天后发现张满了细细的杆菌。。。这是为什么呀。。取样都是在无菌环境接的
发酵液中含有黄豆饼粉颗粒。。。。 灭菌条件121.20min
八层纱布包扎
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1楼 2013-04-06 13:13:20
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江湖笑

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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楼主换12层纱布试试，另外无菌操作注意规范。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2013-04-06 22:57:05
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zjl01234

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+5, good! 2013-04-07 08:16:08
额。。。镜检看不到杂菌不代表木有杂菌，因为杂菌可能还没长到能肉眼看到的数量。LZ好好分析下整个操作过程吧，一般摇瓶染菌的概率还是不大的。从LZ的情况来看，两天就染菌，而且呈杆状，应该是细菌染菌吧，长得快，可能在你接种前染，也可能在摇瓶过程中染。如果检查完操作过程无误还是染菌的话LZ可以鉴定下是哪个菌，根据菌的生长时间、镜检能看到菌的时间来综合判断是哪个时间段染的菌。
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3楼2013-04-06 23:22:06
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tianhome

木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

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八层纱布，肯定会染菌，在纱布里加上一两层棉花，不要用脱脂棉，如果无菌操作过关，肯定没问题，祝你好运！
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虫洞
4楼2013-04-07 03:51:35
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nakamori0319

金虫 (小有名气)

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空消吧，我的瓶子用之前都是至少空消1个小时的，取样用的枪头和离心管都是空消过的，另外，用的超净台尽量是没有大肠和杆菌等用的，用前灭半个小时。。。
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5楼2013-04-07 15:40:10
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qhbsjxqxy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by nakamori0319 at 2013-04-07 15:40:10
空消吧，我的瓶子用之前都是至少空消1个小时的，取样用的枪头和离心管都是空消过的，另外，用的超净台尽量是没有大肠和杆菌等用的，用前灭半个小时。。。

如果实在找不到污染源头，可考虑重新做分离纯化。
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6楼2013-04-08 09:52:15
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wgy2007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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应该是发酵瓶培养基灭菌不彻底造成的，先把黄豆饼粉磨细，过80目的筛子，然后再加入到培养基中，升高灭菌温度和延长灭菌时间，可以123-125度灭菌30-40分钟试一试，或者把黄豆饼粉换了，用大豆蛋白粉或大豆分离蛋白试试，现在很多做链霉菌发酵的用这两种原料。
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7楼2013-04-08 10:19:37
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626474420

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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发酵液中含有黄豆饼粉颗粒。。。。 灭菌条件121.20min

黄豆饼粉颗粒是源头  包裹内部的部分  灭菌20min不彻底  建议完全搅拌开 没有颗粒在灭菌
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8楼2013-04-09 09:11:48
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zhaogz

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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我以前也是用豆粉及8层纱布  没有问题
可能是操作出了问题  小心操作
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9楼2013-04-09 09:17:04
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千丶百度

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1、现在我们实验室用的黄豆饼粉都是先煮沸约一个小时，再用四层纱布过滤去掉滤渣后使用的
2、染菌与否可以通过镜检来初步判断，然后同时涂一块固体平板，固体平板不生杂菌的话大概就没问题了吧
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10楼2013-06-19 20:06:51
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