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东走西顾10

新虫 (初入文坛)

[求助] 做灰色链霉菌摇瓶发酵时,老是染菌.。求助啦

种子液镜检没发现其他菌,接入发酵瓶,两天后发现张满了细细的杆菌。。。这是为什么呀。。取样都是在无菌环境接的
发酵液中含有黄豆饼粉颗粒。。。。 灭菌条件121.20min
八层纱布包扎
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江湖笑

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主换12层纱布试试,另外无菌操作注意规范。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2013-04-06 22:57:05
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zjl01234

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+5, good! 2013-04-07 08:16:08
额。。。镜检看不到杂菌不代表木有杂菌,因为杂菌可能还没长到能肉眼看到的数量。LZ好好分析下整个操作过程吧,一般摇瓶染菌的概率还是不大的。从LZ的情况来看,两天就染菌,而且呈杆状,应该是细菌染菌吧,长得快,可能在你接种前染,也可能在摇瓶过程中染。如果检查完操作过程无误还是染菌的话LZ可以鉴定下是哪个菌,根据菌的生长时间、镜检能看到菌的时间来综合判断是哪个时间段染的菌。
3楼2013-04-06 23:22:06
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tianhome

木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
八层纱布,肯定会染菌,在纱布里加上一两层棉花,不要用脱脂棉,如果无菌操作过关,肯定没问题,祝你好运!
虫洞
4楼2013-04-07 03:51:35
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nakamori0319

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
空消吧,我的瓶子用之前都是至少空消1个小时的,取样用的枪头和离心管都是空消过的,另外,用的超净台尽量是没有大肠和杆菌等用的,用前灭半个小时。。。
5楼2013-04-07 15:40:10
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qhbsjxqxy

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by nakamori0319 at 2013-04-07 15:40:10
空消吧,我的瓶子用之前都是至少空消1个小时的,取样用的枪头和离心管都是空消过的,另外,用的超净台尽量是没有大肠和杆菌等用的,用前灭半个小时。。。

如果实在找不到污染源头,可考虑重新做分离纯化。
6楼2013-04-08 09:52:15
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wgy2007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是发酵瓶培养基灭菌不彻底造成的,先把黄豆饼粉磨细,过80目的筛子,然后再加入到培养基中,升高灭菌温度和延长灭菌时间,可以123-125度灭菌30-40分钟试一试,或者把黄豆饼粉换了,用大豆蛋白粉或大豆分离蛋白试试,现在很多做链霉菌发酵的用这两种原料。
7楼2013-04-08 10:19:37
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626474420

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
发酵液中含有黄豆饼粉颗粒。。。。 灭菌条件121.20min

黄豆饼粉颗粒是源头  包裹内部的部分  灭菌20min不彻底  建议完全搅拌开 没有颗粒在灭菌
8楼2013-04-09 09:11:48
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zhaogz

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我以前也是用豆粉及8层纱布  没有问题
可能是操作出了问题  小心操作
9楼2013-04-09 09:17:04
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千丶百度

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1、现在我们实验室用的黄豆饼粉都是先煮沸约一个小时,再用四层纱布过滤去掉滤渣后使用的
2、染菌与否可以通过镜检来初步判断,然后同时涂一块固体平板,固体平板不生杂菌的话大概就没问题了吧
10楼2013-06-19 20:06:51
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