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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 链霉菌发酵多次出现不正常，求解
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lgs1

木虫 (小有名气)

[求助] 链霉菌发酵多次出现不正常，求解

做了一年的链霉菌发酵了，但是仍然有点门外汉的感觉，实际生产经验比较缺乏，做发酵隔一段时间就会出现一些不正常的现象，最近菌种又出问题了，编号为2号的菌株斜面看上去生长的很好，3天就开始出孢，但这其实是有问题的，以前做过的一株菌（1号）当时斜面孢子长的飞快，发酵的时候第二天就出现自溶，我试了虫友们建议的一些方法，但是没有效果，无奈只好换成2号菌株，关于斜面和发酵的情况大家可以在下面参看我以前的求助帖，2号株发酵倒是没有问题，但是斜面孢子数目就是很少，都不怎么看得见白色粉末，然后我就一直在纯化菌种，直到最近两批2号株开始大量产孢，速度和1号株相似，而结果也是第二天就开始自溶，镜检可以看出发酵液里面又出现了很多杆状的东西，有虫友说是污染，但是我涂了板子没发现杂菌生长，而且重复了几批都是一样的状况，还有一点就是两株菌都是在产孢速度加快了以后才出现了这种现象（之前从来不会这样），如果是污染的话也太巧合了，所以我认为污染的原因可以排除，另外我的所有培养条件都没有改变，我觉得最主要的原因可能还是菌种退化，不知道有没有虫友遇到过相似的状况，能够帮我指点一下这种情况到底是什么原因以及解决的办法，谢谢
附上2号株最近拍的片子：
图1.生长良好的菌
图2.发酵液中的杆状物

以前的求助帖：
1、2号菌株斜面对比http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5086013
1号株发酵状况http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4591800&page=1

图1.jpg



图2.jpg
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1楼2013-01-05 00:46:52
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yhzlhe

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
lgs1: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-01-16 11:15:49
laozuzunzhe: 金币+5, good! 2013-04-07 08:17:14
我以前也遇到过类似的情况，一般应从配方、供氧和菌种本身3个方面去考虑。首先，你用的应该是工程菌，那么肯定存在菌种衰退问题，在菌种较弱时要活化菌种，再筛选、复筛，使其纯度提高，那么问题也许迎刃而解；其次，要从供氧条件上加以改善，摇瓶与发酵罐供氧条件差别很大，这个不用多说，应该容易想办法；最后，就是配方要变动，不同菌种对配方的要求是不一样的，建议你做个正交实验或PB，大致上可以确定配方的问题。以上是我浅见，希望对你有所帮助。
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2楼2013-01-15 11:07:11
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lgs1

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yhzlhe at 2013-01-15 11:07:11
我以前也遇到过类似的情况，一般应从配方、供氧和菌种本身3个方面去考虑。首先，你用的应该是工程菌，那么肯定存在菌种衰退问题，在菌种较弱时要活化菌种，再筛选、复筛，使其纯度提高，那么问题也许迎刃而解；其次 ...

谢谢你的建议，我这个菌不是工程菌，只是诱变了一下，我觉得应该不是供氧条件和配方上面的问题，因为在诱变完了以后做的好几批都是正常的，配方和培养条件都没有变，只是在最近几批突然出现这种状况，也就是突然大量产孢的时候，所以我觉得是菌种衰退的问题，我现在在试一个低温冷冻复壮的方法，效果还没出来，不知道你有没有比较好的复壮方法
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3楼2013-01-16 11:24:56
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lunantrade31

新虫 (初入文坛)
会不会污染噬菌体，你拍个电镜看看。
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4楼2013-01-17 10:53:07
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普通回帖

lgs1

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lunantrade31 at 2013-01-17 10:53:07
会不会污染噬菌体，你拍个电镜看看。

我拍过一次，没看见有污染
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5楼2013-01-17 16:44:58
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tianhome

木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

老朽无知，怎么看着像子囊菌，不象链霉菌，阁下在什么显微镜下拍的？放大倍数是多少？
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虫洞
6楼2013-04-07 03:59:56
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lgs1

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by tianhome at 2013-04-07 03:59:56
老朽无知，怎么看着像子囊菌，不象链霉菌，阁下在什么显微镜下拍的？放大倍数是多少？

我这个是链霉菌属的，图里面是菌丝球，图片是在zeiss的显微镜上拍的，放大倍数是400倍，你以前遇到过这种情况吗
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7楼2013-04-07 17:09:16
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tianhome

木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

抱歉，哥们说错了，看了你原来帖子中菌落的照片的确是链霉菌。我么做过链霉菌，也是个外行。但听说链霉菌遗传性状很不稳定，线性染色体两端的基因经常丢失，其中就包含有关产孢的基因，工业上链霉菌菌种需要不停的复壮，淘汰那些不产孢的菌落。至于自容的原因也很多，营养条件不适(包括碳氮源、温度、pH等)、噬菌体感染、细菌污染，恐怕需要一一排除。冒昧胡说，仅供参考！
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虫洞
8楼2013-04-07 19:47:38
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chengjg

木虫 (正式写手)
貌似我的放线菌在液体培养基内几乎不产孢子，在固体斜面上才产。
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9楼2013-04-09 14:20:16
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wyz5527

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

第二个是碎菌丝，不是杂菌
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简练才是真正的丰富
10楼2013-06-20 10:56:31
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