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lgs1

木虫 (小有名气)

[求助] 链霉菌发酵多次出现不正常,求解

做了一年的链霉菌发酵了,但是仍然有点门外汉的感觉,实际生产经验比较缺乏,做发酵隔一段时间就会出现一些不正常的现象,最近菌种又出问题了,编号为2号的菌株斜面看上去生长的很好,3天就开始出孢,但这其实是有问题的,以前做过的一株菌(1号)当时斜面孢子长的飞快,发酵的时候第二天就出现自溶,我试了虫友们建议的一些方法,但是没有效果,无奈只好换成2号菌株,关于斜面和发酵的情况大家可以在下面参看我以前的求助帖,2号株发酵倒是没有问题,但是斜面孢子数目就是很少,都不怎么看得见白色粉末,然后我就一直在纯化菌种,直到最近两批2号株开始大量产孢,速度和1号株相似,而结果也是第二天就开始自溶,镜检可以看出发酵液里面又出现了很多杆状的东西,有虫友说是污染,但是我涂了板子没发现杂菌生长,而且重复了几批都是一样的状况,还有一点就是两株菌都是在产孢速度加快了以后才出现了这种现象(之前从来不会这样),如果是污染的话也太巧合了,所以我认为污染的原因可以排除,另外我的所有培养条件都没有改变,我觉得最主要的原因可能还是菌种退化,不知道有没有虫友遇到过相似的状况,能够帮我指点一下这种情况到底是什么原因以及解决的办法,谢谢
附上2号株最近拍的片子:
图1.生长良好的菌
图2.发酵液中的杆状物

以前的求助帖:
1、2号菌株斜面对比http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5086013
1号株发酵状况http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4591800&page=1

图1.jpg



图2.jpg
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chengjg

木虫 (正式写手)

貌似我的放线菌在液体培养基内几乎不产孢子,在固体斜面上才产。
9楼2013-04-09 14:20:16
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yhzlhe

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
lgs1: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-01-16 11:15:49
laozuzunzhe: 金币+5, good! 2013-04-07 08:17:14
我以前也遇到过类似的情况,一般应从配方、供氧和菌种本身3个方面去考虑。首先,你用的应该是工程菌,那么肯定存在菌种衰退问题,在菌种较弱时要活化菌种,再筛选、复筛,使其纯度提高,那么问题也许迎刃而解;其次,要从供氧条件上加以改善,摇瓶与发酵罐供氧条件差别很大,这个不用多说,应该容易想办法;最后,就是配方要变动,不同菌种对配方的要求是不一样的,建议你做个正交实验或PB,大致上可以确定配方的问题。以上是我浅见,希望对你有所帮助。
2楼2013-01-15 11:07:11
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lgs1

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yhzlhe at 2013-01-15 11:07:11
我以前也遇到过类似的情况,一般应从配方、供氧和菌种本身3个方面去考虑。首先,你用的应该是工程菌,那么肯定存在菌种衰退问题,在菌种较弱时要活化菌种,再筛选、复筛,使其纯度提高,那么问题也许迎刃而解;其次 ...

谢谢你的建议,我这个菌不是工程菌,只是诱变了一下,我觉得应该不是供氧条件和配方上面的问题,因为在诱变完了以后做的好几批都是正常的,配方和培养条件都没有变,只是在最近几批突然出现这种状况,也就是突然大量产孢的时候,所以我觉得是菌种衰退的问题,我现在在试一个低温冷冻复壮的方法,效果还没出来,不知道你有没有比较好的复壮方法
3楼2013-01-16 11:24:56
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lunantrade31

新虫 (初入文坛)

会不会污染噬菌体,你拍个电镜看看。
4楼2013-01-17 10:53:07
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