| 查看: 2487 | 回复: 9 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
raohuihua新虫 (小有名气)
|
[求助]
粘性末端老是连接不上
|
|
|
小妹最近在做一个质粒与片段粘性末端连接，体系如下： 载体6055bp 3ul 片段1758bp 4ul 10xT4ligase buffer 1ul T4 ligase (Takara) 1ul PEG 4000 1ul.............................10ul，4°过夜，转化TOP10 片段是PCR扩增胶回收得到，载体和片段均用NcoI 酶切回收纯化，没有测浓度，但是有跑胶，亮度还行，载体是GN抗性的，片段是 tet 抗性，转化后我分别铺了tet 、tet+GN的板，都没有长，究竟是什么原因呢？附上我的电泳图，有哪位大侠能够指导一下？不甚感激。 后来又换了个体系，如下，还是没有连接成功 载体6055bp 2ul 片段1758bp 5ul 10xT4ligase buffer 1ul T4 ligase (Takara) 1ul ddH20 1ul................10ul  w27h2626338_1404100224_785.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有265人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 粘性末端连接时长问题
已经有27人回复
- 平端酶与粘性末端酶一起使用，产物能否与目标片段一起链接呢？
已经有12人回复
- 合成的引物直接退火形成粘性末端后连入载体
已经有13人回复
- BamHI,SmaI平末端粘性末端连接问题
已经有11人回复
- pMD19-T双酶切，目的片段上酶切位点和载体上一样
已经有7人回复
- 载体去磷酸化后大小变大
已经有3人回复
- 请问这个物质中Al和O是怎么连接的？
已经有4人回复
- PCR产物平末端化问题
已经有5人回复
- 目的基因连T载体能连上，双酶切后连不上HTB质粒，都三个月了，纠结啊。。。
已经有21人回复
- 克隆基因为什么一直连不到载体上
已经有11人回复
- 关于目的基因不同向连接到T载体上的问题
已经有19人回复
- 2.7Kb的片段连接问题
已经有6人回复
- 酶切后的补平连接
已经有9人回复
- 关于平末端连接
已经有14人回复
- 一个平末端和粘性末端怎样连接比较好
已经有8人回复
- 表达载体的链接
已经有16人回复
- 双酶切粘性末端连接不上
已经有21人回复
- 虚心请教关于平—粘末端的连接问题
已经有18人回复
- 高保真酶PCR产物连接pMD-19T载体，DH5a感受态，怎么总是连接不上
已经有26人回复
- DNA片段经过酶切后的粘性末端怎么磨平？
已经有15人回复
- PCR ， 双酶切，连接问题
已经有17人回复
- 【求助/交流】酶切后的粘性末端补平
已经有4人回复
- 【求助/交流】质粒跟目的基因连接不上怎么办
已经有17人回复
- 【求助/交流】PCR产物连接请教！
已经有5人回复
7楼2014-07-10 19:42:12
2楼2014-07-10 00:53:32
raohuihua
新虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 510.3
- 散金: 30
- 帖子: 95
- 在线: 27小时
- 虫号: 2626338
- 注册: 2013-08-31
- 专业: 病原微生物变异与耐药
3楼2014-07-10 09:02:51
4楼2014-07-10 11:15:28
40