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wenzi6337木虫 (著名写手)
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[求助]
求助SMART RACE ，5‘-RACE问题 已有4人参与
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| 如题，我在做SMART RACE时首先用随机引物和通用引物合成cDNA，然后以cDNA为模板用Short2引物和CDS特异性引物扩增，切胶回收500-700bp条带，连pMD-18T载体测序，问题是，测序结果显示有片段连入，但不是我要找的CDS序列，请教各位大侠，是什么地方出了问题？为什么CDS引物扩出无关条带？是引物特异性差吗？请了解SMART RACE的大侠指点一二，不胜感激！ |
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wenzi6337
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4楼2014-07-09 13:59:51
Fleaves
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2楼2014-07-09 11:30:48
【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
wenzi6337: 金币+10, ★★★很有帮助, 非常感谢啊！ 2014-07-09 14:01:18
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2014-07-09 16:07:35
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2014-07-09 16:07:35
| 为了保障你的RACE能够特异性，请设计多条引物，有种方法叫做 Asymetric PCR with nested primer。即，先用你的specific 引物1 单引物扩增10-50个cycle，然后再用新的specific 引物2 （引物2的位置应该在引物1的上游）和5‘ 末端引物进行正常PCR扩增。 祝好！ |
3楼2014-07-09 13:58:19
Neo2000
木虫 (著名写手)
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5楼2014-07-09 19:25:08
