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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助做反向PCR的高手们
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shellyxss

金虫 (正式写手)

[求助] 求助做反向PCR的高手们 已有1人参与

我做的反向PCR，如果按照扩增方向是正义链5'到3'方向设计的引物，测出来的序列的5'端应该能和正义链3'端的序列拼接上才对呀，为什么测序出来拼接不上呢。另外按照上述方向设计引物扩增出来的序列的3'端和正义链的5'端有200个碱基覆盖，相似度是90%，但是扩增出来的序列的3'端最后8个碱基没有覆盖到正义链，这个可以说扩增出来的3'端和正义链的5'端能够拼接上嘛？

说的有点复杂，希望大家可以看懂啊。。。。

谢谢大家了~
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Always be curious about nature
1楼 2014-07-06 21:32:47
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shellyxss

金虫 (正式写手)
自己顶一下。。。。
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Always be curious about nature
2楼2014-07-07 09:53:18
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shellyxss

金虫 (正式写手)
有高手知道吗？
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Always be curious about nature
3楼2014-07-08 08:37:26
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shellyxss

金虫 (正式写手)
再自己顶一下。。。。
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Always be curious about nature
4楼2014-07-10 08:40:27
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shellyxss

金虫 (正式写手)
来看看啊
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Always be curious about nature
5楼2014-07-16 15:23:25
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shellyxss

金虫 (正式写手)
。。。
6楼2014-07-17 08:31:49
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杀手不太冷

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
shellyxss: 金币+20 2014-07-19 18:39:29
我也刚刚开始做的，不过我做的是基因组酶切后做的，不知楼主模板是什么
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7楼2014-07-18 17:06:13
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shellyxss

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 杀手不太冷 at 2014-07-18 17:06:13
我也刚刚开始做的，不过我做的是基因组酶切后做的，不知楼主模板是什么

我也是酶切的基因组
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8楼2014-07-19 18:39:41
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xjhsm

银虫 (小有名气)
我最近在做反向pcr，你的酶是怎么选择的？引物设计时，你是怎么确定载体左右臂具体在什么位置？
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越努力，越幸运！
9楼2014-12-10 17:35:19
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shellyxss

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by xjhsm at 2014-12-10 17:35:19
我最近在做反向pcr，你的酶是怎么选择的？引物设计时，你是怎么确定载体左右臂具体在什么位置？

限制酶的话是根据已经扩增得到的序列、最相似序列分析限制酶切位点，用排除法选择实验室或者市面上的限制酶。
至于载体，我没有用到载体。
不知道对你有没有帮助
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10楼2014-12-11 14:25:04
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