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我做的反向PCR，如果按照扩增方向是正义链5'到3'方向设计的引物，测出来的序列的5'端应该能和正义链3'端的序列拼接上才对呀，为什么测序出来拼接不上呢。另外按照上述方向设计引物扩增出来的序列的3'端和正义链的5'端有200个碱基覆盖，相似度是90%，但是扩增出来的序列的3'端最后8个碱基没有覆盖到正义链，这个可以说扩增出来的3'端和正义链的5'端能够拼接上嘛？ 说的有点复杂，希望大家可以看懂啊。。。。 谢谢大家了~  |
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 核酸生物学实验经验 |
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