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我做的反向PCR,如果按照扩增方向是正义链5'到3'方向设计的引物,测出来的序列的5'端应该能和正义链3'端的序列拼接上才对呀,为什么测序出来拼接不上呢。另外按照上述方向设计引物扩增出来的序列的3'端和正义链的5'端有200个碱基覆盖,相似度是90%,但是扩增出来的序列的3'端最后8个碱基没有覆盖到正义链,这个可以说扩增出来的3'端和正义链的5'端能够拼接上嘛? 说的有点复杂,希望大家可以看懂啊。。。。 谢谢大家了~ ![]() |
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