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shellyxss

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[求助] 求助做反向PCR的高手们已有1人参与

我做的反向PCR，如果按照扩增方向是正义链5'到3'方向设计的引物，测出来的序列的5'端应该能和正义链3'端的序列拼接上才对呀，为什么测序出来拼接不上呢。另外按照上述方向设计引物扩增出来的序列的3'端和正义链的5'端有200个碱基覆盖，相似度是90%，但是扩增出来的序列的3'端最后8个碱基没有覆盖到正义链，这个可以说扩增出来的3'端和正义链的5'端能够拼接上嘛？

说的有点复杂，希望大家可以看懂啊。。。。

谢谢大家了~

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1楼2014-07-06 21:32:47

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shellyxss

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引用回帖:

9楼: Originally posted by xjhsm at 2014-12-10 17:35:19
我最近在做反向pcr，你的酶是怎么选择的？引物设计时，你是怎么确定载体左右臂具体在什么位置？

限制酶的话是根据已经扩增得到的序列、最相似序列分析限制酶切位点，用排除法选择实验室或者市面上的限制酶。
至于载体，我没有用到载体。
不知道对你有没有帮助

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10楼2014-12-11 14:25:04

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shellyxss

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2楼2014-07-07 09:53:18

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4楼2014-07-10 08:40:27

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【答案】应助回帖

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shellyxss: 金币+20 2014-07-19 18:39:29

我也刚刚开始做的，不过我做的是基因组酶切后做的，不知楼主模板是什么

7楼2014-07-18 17:06:13

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