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shellyxss

金虫 (正式写手)

[求助] 求助做反向PCR的高手们 已有1人参与

我做的反向PCR,如果按照扩增方向是正义链5'到3'方向设计的引物,测出来的序列的5'端应该能和正义链3'端的序列拼接上才对呀,为什么测序出来拼接不上呢。另外按照上述方向设计引物扩增出来的序列的3'端和正义链的5'端有200个碱基覆盖,相似度是90%,但是扩增出来的序列的3'端最后8个碱基没有覆盖到正义链,这个可以说扩增出来的3'端和正义链的5'端能够拼接上嘛?

说的有点复杂,希望大家可以看懂啊。。。。

谢谢大家了~
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shellyxss

金虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by xjhsm at 2014-12-10 17:35:19
我最近在做反向pcr,你的酶是怎么选择的?引物设计时,你是怎么确定载体左右臂具体在什么位置?

限制酶的话是根据已经扩增得到的序列、最相似序列分析限制酶切位点,用排除法选择实验室或者市面上的限制酶。
至于载体,我没有用到载体。
不知道对你有没有帮助
Always be curious about nature
10楼2014-12-11 14:25:04
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shellyxss

金虫 (正式写手)

自己顶一下。。。。
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2楼2014-07-07 09:53:18
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shellyxss

金虫 (正式写手)

再自己顶一下。。。。
Always be curious about nature
4楼2014-07-10 08:40:27
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杀手不太冷

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
shellyxss: 金币+20 2014-07-19 18:39:29
我也刚刚开始做的,不过我做的是基因组酶切后做的,不知楼主模板是什么
7楼2014-07-18 17:06:13
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