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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 了解反向PCR、嵌套PCR的虫子们进来看一下吧~
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shellyxss

金虫 (正式写手)

[求助] 了解反向PCR、嵌套PCR的虫子们进来看一下吧~已有5人参与

最近一直在做反向PCR，用了嵌套PCR，每一次用第一对引物扩增的时候都没有明显的条带，但是用第二对引物对第一次扩增后的产物进行PCR的时候就有条带。为什么用第一对引物就没有明显的条带呢？
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1楼2014-06-25 19:55:46
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-25 20:24:34
shellyxss: 金币+5, ★有帮助 2014-06-26 12:42:50
这是一个目的条带逐渐富集的过程，策略很重要

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-06-25 20:22:51
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
shellyxss: 金币+7, ★★★很有帮助 2014-06-26 12:41:57
我以前也用过iPCR配合nested PCR克隆已知序列的侧翼序列，外引物PCR后就是看不到条带，很正常的现象
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2014-06-25 20:25:52
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shellyxss

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-25 20:22:51
这是一个目的条带逐渐富集的过程，策略很重要

4楼2014-06-26 12:42:29
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shellyxss

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gyesang at 2014-06-25 20:25:52
我以前也用过iPCR配合nested PCR克隆已知序列的侧翼序列，外引物PCR后就是看不到条带，很正常的现象

那么外引物扩增完之后需要对PCR产物稀释后再进行第二次PCR嘛？
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5楼2014-06-26 12:43:32
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by shellyxss at 2014-06-26 12:43:32
那么外引物扩增完之后需要对PCR产物稀释后再进行第二次PCR嘛？...

稀释50倍，取2ul继续第二次PCR
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6楼2014-06-26 13:03:36
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fly_锋

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
shellyxss: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-06-26 14:57:11
不用着急，这是个正常现象！嵌套的内部扩增才是你要的，所以你得到结果了！
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7楼2014-06-26 13:40:01
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zhenwuhuang

至尊木虫 (文学泰斗)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
shellyxss: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-06-26 14:58:08
正常现象！难道第一次扩增后的产物对你很重要吗？
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8楼2014-06-26 14:12:02
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shellyxss

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by gyesang at 2014-06-26 13:03:36
稀释50倍，取2ul继续第二次PCR...

我前几次都没有稀释，虽然扩增出来了条带，但是不知道不稀释这样操作有没有影响呢
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9楼2014-06-26 14:57:04
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shellyxss

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by zhenwuhuang at 2014-06-26 14:12:02
正常现象！难道第一次扩增后的产物对你很重要吗？

倒也不是重要，就是不知道为什么第一次扩增的时候没有明显的条带
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10楼2014-06-26 14:59:03
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