24小时热门版块排行榜

返回列表

xuanyalizi

铁虫 (小有名气)

应助: 5 (幼儿园)
金币: 50.2
帖子: 74
在线: 14.9小时
虫号: 965770
注册: 2010-03-09
性别: GG
专业: 微生物生理与生物化学

[交流] 酶切星号活性已有2人参与

各位大侠好：
最近酶切实验遇到1个怪异的情况，我是小抽的质粒做酶切鉴定，50 ul体系，大概1ug质粒，用fermentas的快切酶NotI/SpeI，1是酶切大约1个小时，2是酶切大概20min的，质粒一样，酶也一样，这是星号活性吗，按说不至于，这两个酶都是16hr以上才可能会的。请大家讨论指教。

1.jpg

2.jpg

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

质粒构建，挑单菌落验证总是假阳性，求分析原因？！已经有29人回复
双酶切后，质粒条带弥散已经有13人回复
用Nde1和Pst1双酶切，构载体总是不成功已经有4人回复
质粒pPICZA用XhoI与NotI酶切，酶切5h后条带变成250bp左右已经有6人回复
酶切呈现弥散带已经有6人回复
原核表达重组表达载体的连问题已经有14人回复
pGEM-T质粒酶切时遇到的一些问题已经有11人回复
酶纯化后没有活性已经有13人回复
双酶切粘性末端连接不上已经有21人回复
T载体酶切片段与目的片段大小不一致已经有12人回复
影响酶切的几个主要因素已经有13人回复
环形质粒酶切电泳图分析求解已经有25人回复
什么是限制性内切核酸酶的星号活性? 已经有12人回复
表达载体双酶切已经有9人回复
关于酶切的小问题已经有10人回复
双酶切体系是什么意思已经有7人回复
外切核酸酶(校正)活性是什么意思已经有4人回复
【分享】分子克隆实验专题-（二）酶切连接要点探讨已经有15人回复
【求助/交流】质粒单酶切后竟然两条带已经有32人回复
【求助/交流】提DNA，无水乙醇已经有17人回复
【求助/交流】酶切时间确定？已经有7人回复

闲适恬淡，宠辱不惊

1楼 2014-06-26 10:34:58

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

专家经验: +140
MolEPI: 2
应助: 308 (大学生)
金币: 1075.5
散金: 8294
红花: 65
沙发: 5
帖子: 1996
在线: 266.1小时
虫号: 3188421
注册: 2014-05-07
专业: 生物化学
管辖: 分子生物

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-26 13:15:07

导致星号活性因素
　　较高的甘油浓度（>5% v/v）；
　　酶与底物DNA比例过高（不同的酶情况不同，通常为>100 U/µg）；
　　低盐浓度（<25 mM）
　　高pH值（>pH 8.0）
　　存在有机溶剂（如DMSO、乙醇(9)、乙烯乙二醇、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺、sulphalane(12)等）
　　用其他二价离子替代镁离子（如Mn++，Cu++，Co++，Zn++等）
　　以上因素的影响程度因酶的不同而有所不同。例如EcoR I比 Pst I对甘油浓度更敏感，而后者则对高pH值更敏感一些