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553173045

铜虫 (初入文坛)

[求助] 质粒pPICZA用XhoI与NotI酶切,酶切5h后条带变成250bp左右 已有4人参与

pPICZA提质粒跑胶有两条带,一条大概在250bp左右,另外一个是3000左右的条带,经XhoI与NotI酶切后,跑胶条带全部在250bp左右,另外一条带全部消失了 ,请问是怎么回事,是DNA裂解酶污染吗?胶应该没问题,Marker都正常.
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没有完成不了的事,只有自己愿不愿意去做
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lihaokkkk

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我不想打击你
我认为时候未到,,,
你等春天了,下雨的日子,肯定能解决问题
2楼2014-01-03 16:04:15
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hathryn

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-01-04 00:32:35
250bp的那个是杂带吧?如果酶切位点是单一的话,质粒切时间太长可能会切碎,你用的酶是哪个公司的?有的公司的酶不稳定,时间一长没有星号活性的都有星号活性了……

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2014-01-03 18:33:41
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
250bp的带可能是RNA。酶切后大条带完全消失可能是酶切体系有污染。你试试用同样的buffer和酶切其它质粒看看是不是也有问题。
4楼2014-01-04 06:50:18
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553173045

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-04 06:50:18
250bp的带可能是RNA。酶切后大条带完全消失可能是酶切体系有污染。你试试用同样的buffer和酶切其它质粒看看是不是也有问题。

我试过其他的酶,但效果是一样的.250bp可能是RNA
没有完成不了的事,只有自己愿不愿意去做
5楼2014-01-07 22:01:46
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553173045

铜虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by hathryn at 2014-01-03 18:33:41
250bp的那个是杂带吧?如果酶切位点是单一的话,质粒切时间太长可能会切碎,你用的酶是哪个公司的?有的公司的酶不稳定,时间一长没有星号活性的都有星号活性了……

还在验证中,但酶的问题可能性很小,但还是谢谢你!
没有完成不了的事,只有自己愿不愿意去做
6楼2014-01-07 22:06:19
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lxyzsx

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

建议重新摇菌液,提取质粒;再不行的话转克隆感受态试试

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
7楼2014-01-08 06:48:43
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