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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒pPICZA用XhoI与NotI酶切，酶切5h后条带变成250bp左右
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553173045

铜虫 (初入文坛)

[求助] 质粒pPICZA用XhoI与NotI酶切，酶切5h后条带变成250bp左右 已有4人参与

pPICZA提质粒跑胶有两条带，一条大概在250bp左右，另外一个是3000左右的条带，经XhoI与NotI酶切后，跑胶条带全部在250bp左右，另外一条带全部消失了 ，请问是怎么回事，是DNA裂解酶污染吗？胶应该没问题，Marker都正常.
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没有完成不了的事，只有自己愿不愿意去做
1楼 2014-01-03 15:46:28
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lihaokkkk

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我不想打击你
我认为时候未到，，，
你等春天了，下雨的日子，肯定能解决问题
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2楼2014-01-03 16:04:15
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hathryn

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-04 00:32:35
250bp的那个是杂带吧？如果酶切位点是单一的话，质粒切时间太长可能会切碎，你用的酶是哪个公司的？有的公司的酶不稳定，时间一长没有星号活性的都有星号活性了……
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

553173045
3楼2014-01-03 18:33:41
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
250bp的带可能是RNA。酶切后大条带完全消失可能是酶切体系有污染。你试试用同样的buffer和酶切其它质粒看看是不是也有问题。
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4楼2014-01-04 06:50:18
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553173045

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-04 06:50:18
250bp的带可能是RNA。酶切后大条带完全消失可能是酶切体系有污染。你试试用同样的buffer和酶切其它质粒看看是不是也有问题。

我试过其他的酶,但效果是一样的.250bp可能是RNA
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没有完成不了的事，只有自己愿不愿意去做
5楼2014-01-07 22:01:46
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553173045

铜虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by hathryn at 2014-01-03 18:33:41
250bp的那个是杂带吧？如果酶切位点是单一的话，质粒切时间太长可能会切碎，你用的酶是哪个公司的？有的公司的酶不稳定，时间一长没有星号活性的都有星号活性了……

还在验证中,但酶的问题可能性很小,但还是谢谢你!
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没有完成不了的事，只有自己愿不愿意去做
6楼2014-01-07 22:06:19
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lxyzsx

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

建议重新摇菌液，提取质粒；再不行的话转克隆感受态试试

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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7楼2014-01-08 06:48:43
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