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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切呈现弥散带
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luodengpan

新虫 (小有名气)

[求助] 酶切呈现弥散带 已有1人参与

我把我的目的基因连到超表达载体上，菌液检测为阳性，提质粒条带很亮，但是酶切验证的时候却发现曾向下的弥散带，很严重，但是隐约也能看到我的目的条带。重新提了几次质粒，都是这种情况。我用的是BAMH1和EcoR1.请各位大侠帮帮忙啊
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1楼 2013-06-09 23:52:41
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
luodengpan(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物版块 期待你的精彩和更详细的解答。 2013-06-29 20:22:32
可能是酶的问题，用这两个酶切其它质粒也是这样吗？可以试试换一管酶。
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2楼2013-06-10 01:22:35
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
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kx444555: 金币+1, 楼主可以试试看 2013-06-10 13:25:19
luodengpan(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-29 20:22:08
换成新鲜的内切酶，而且反应前用透析或者超滤去掉酶制剂中的甘油，以免引起内切酶的星号活性。
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3楼2013-06-10 01:38:15
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带刺毛毛虫

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
luodengpan(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-29 20:22:18
我用的EcoR1也是，有星号活性，可以选载体上还保留的其他酶切位点试试
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加油
4楼2013-06-10 09:52:06
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luodengpan

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-10 01:22:35
可能是酶的问题，用这两个酶切其它质粒也是这样吗？可以试试换一管酶。

做阳性对照，切T载上的这个基因时，没得这种现象
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5楼2013-06-11 12:06:59
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by luodengpan at 2013-06-11 12:06:59
做阳性对照，切T载上的这个基因时，没得这种现象...

可能是酶切条件没有控制好。比方说酶的用量、作用时间什么的。
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6楼2013-06-12 03:00:17
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李子李

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我现在也有这个问题，在扩增菌株里的质粒不弥散，在表达菌株里的质粒酶切弥散。
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宁静致远
7楼2016-03-10 11:07:09
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