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luodengpan

新虫 (小有名气)

[求助] 酶切呈现弥散带 已有1人参与

我把我的目的基因连到超表达载体上,菌液检测为阳性,提质粒条带很亮,但是酶切验证的时候却发现曾向下的弥散带,很严重,但是隐约也能看到我的目的条带。重新提了几次质粒,都是这种情况。我用的是BAMH1和EcoR1.请各位大侠帮帮忙啊
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
luodengpan(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物版块 期待你的精彩和更详细的解答。 2013-06-29 20:22:32
可能是酶的问题,用这两个酶切其它质粒也是这样吗?可以试试换一管酶。
2楼2013-06-10 01:22:35
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 楼主可以试试看 2013-06-10 13:25:19
luodengpan(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-29 20:22:08
换成新鲜的内切酶,而且反应前用透析或者超滤去掉酶制剂中的甘油,以免引起内切酶的星号活性。
3楼2013-06-10 01:38:15
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带刺毛毛虫

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
luodengpan(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-29 20:22:18
我用的EcoR1也是,有星号活性,可以选载体上还保留的其他酶切位点试试
加油
4楼2013-06-10 09:52:06
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luodengpan

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-10 01:22:35
可能是酶的问题,用这两个酶切其它质粒也是这样吗?可以试试换一管酶。

做阳性对照,切T载上的这个基因时,没得这种现象
5楼2013-06-11 12:06:59
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by luodengpan at 2013-06-11 12:06:59
做阳性对照,切T载上的这个基因时,没得这种现象...

可能是酶切条件没有控制好。比方说酶的用量、作用时间什么的。
6楼2013-06-12 03:00:17
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李子李

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我现在也有这个问题,在扩增菌株里的质粒不弥散,在表达菌株里的质粒酶切弥散。
宁静致远
7楼2016-03-10 11:07:09
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