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xuanyalizi铁虫 (小有名气)
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[交流]
酶切星号活性 已有2人参与
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各位大侠好： 最近酶切实验遇到1个怪异的情况，我是小抽的质粒做酶切鉴定，50 ul体系，大概1ug质粒，用fermentas的快切酶NotI/SpeI，1是酶切大约1个小时，2是酶切大概20min的，质粒一样，酶也一样，这是星号活性吗，按说不至于，这两个酶都是16hr以上才可能会的。请大家讨论指教。  1.jpg  2.jpg |
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-26 13:15:07
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导致星号活性因素 较高的甘油浓度（>5% v/v）； 酶与底物DNA比例过高（不同的酶情况不同，通常为>100 U/µg）； 低盐浓度（<25 mM） 高pH值（>pH 8.0） 存在有机溶剂（如DMSO、乙醇(9)、乙烯乙二醇、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺、sulphalane(12)等） 用其他二价离子替代镁离子（如Mn++，Cu++，Co++，Zn++等） 以上因素的影响程度因酶的不同而有所不同。例如EcoR I比 Pst I对甘油浓度更敏感，而后者则对高pH值更敏感一些 |
2楼2014-06-26 12:05:55
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