应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 连接转化实验
81/1返回列表
查看: 1620  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

呀薯条

金虫 (小有名气)

[求助] 连接转化实验 已有5人参与

为了提高连接效率，我通常都是连接过夜。有个问题，一直很疑惑，想和大家讨论下：就是有时做到转化步骤，刚好是半上午或者中午，那这样涂好平板后，置于37度开始培养，到晚上11点左右，还只有 零星几个菌落，那我是这个晚上继续培养呢，还是室温放置，让它缓慢培养？因为要是仍置于37度的话，等到第二天早上，已经超过16个小时，可能会有卫星菌落产生，这个不是就会对阳性菌落的挑选有影响？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-06-24 21:09:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seven拂晓

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-06-25 08:28:17
过夜连接的产物可以先放到4度冰箱里 多连几个小时不是事  我导师说他们以前都是16度连24小时，再4度连24小时的。下午3、4点再做转化吧
赞一下 回复此楼
2楼2014-06-24 23:26:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
呀薯条(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-25 13:26:42
我用neb的连接酶，一般16度连个把小时，甚至就半小时，直接转化，效果一直挺好

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
3楼2014-06-25 08:51:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
呀薯条(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-06-25 13:26:58
你那个晚上室温放置，让它缓慢培养比较好。第二天早上一来，就长得挺大，挑单克隆，下午五点多提质粒，晚上酶切过夜，第二天跑胶检测。
赞一下 回复此楼
4楼2014-06-25 08:55:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yzj926521

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
呀薯条(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-25 13:27:09
呀薯条: 金币+2, ★有帮助 2014-06-30 08:54:47
可以选择过夜连接后，在次日的下午3-4点中做转化，培养一夜时间能刚好的
赞一下 回复此楼
5楼2014-06-25 09:55:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-06-25 08:55:50
你那个晚上室温放置，让它缓慢培养比较好。第二天早上一来，就长得挺大，挑单克隆，下午五点多提质粒，晚上酶切过夜，第二天跑胶检测。

楼主，想请教一下，挑了单克隆，在1ml离心管中扩培，提的质粒，浓度大致是多少，我的扩培十个小时左右，质粒浓度20-30ng，是不是太低了
赞一下 回复此楼
踏实
6楼2014-07-15 17:33:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

泥鳅越钻越深

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
呀薯条(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-15 18:37:50
我之前是这么办的，效果没影响。就是涂完板之后先放那，或者先放一两个小时，晚上再放进去，一早来正好。
赞一下 回复此楼
Decision Is So Important !
7楼2014-07-15 17:55:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by hajierlove at 2014-07-15 17:33:16
楼主，想请教一下，挑了单克隆，在1ml离心管中扩培，提的质粒，浓度大致是多少，我的扩培十个小时左右，质粒浓度20-30ng，是不是太低了...

挑单克隆后，在2mlLB中摇（含抗生素），最后用20ulTER溶解，每次我做约400-500ng/ul。
赞一下 回复此楼
8楼2014-07-15 20:14:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 呀薯条 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 09:01 by 2lRNluKrJpwL
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 07:55 by GBJlw5zzHWpZ
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:43 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-06 05:33 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 12/600 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 8/400 2026-11-06 05:22 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 05:21 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 kvewwGtKktqB 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 16/800 2026-11-06 04:58 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 4/200 2026-11-06 02:37 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-06 02:24 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:15 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
[基金申请] 各位基础老师们，看完中央《从严治党》的决定后，对学术界更加有信心了吧 +5 iaeyuan 2026-11-01 5/250 2026-11-04 14:43 by jinchengzi
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭