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呀薯条

金虫 (小有名气)

[求助] 连接转化实验 已有5人参与

为了提高连接效率,我通常都是连接过夜。有个问题,一直很疑惑,想和大家讨论下:就是有时做到转化步骤,刚好是半上午或者中午,那这样涂好平板后,置于37度开始培养,到晚上11点左右,还只有 零星几个菌落,那我是这个晚上继续培养呢,还是室温放置,让它缓慢培养?因为要是仍置于37度的话,等到第二天早上,已经超过16个小时,可能会有卫星菌落产生,这个不是就会对阳性菌落的挑选有影响?
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seven拂晓

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-06-25 08:28:17
过夜连接的产物可以先放到4度冰箱里 多连几个小时不是事  我导师说他们以前都是16度连24小时,再4度连24小时的。下午3、4点再做转化吧
2楼2014-06-24 23:26:18
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
呀薯条(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-25 13:26:42
我用neb的连接酶,一般16度连个把小时,甚至就半小时,直接转化,效果一直挺好

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-06-25 08:51:14
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
呀薯条(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-06-25 13:26:58
你那个晚上室温放置,让它缓慢培养比较好。第二天早上一来,就长得挺大,挑单克隆,下午五点多提质粒,晚上酶切过夜,第二天跑胶检测。
4楼2014-06-25 08:55:50
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yzj926521

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
呀薯条(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-25 13:27:09
呀薯条: 金币+2, 有帮助 2014-06-30 08:54:47
可以选择过夜连接后,在次日的下午3-4点中做转化,培养一夜时间能刚好的
5楼2014-06-25 09:55:53
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-06-25 08:55:50
你那个晚上室温放置,让它缓慢培养比较好。第二天早上一来,就长得挺大,挑单克隆,下午五点多提质粒,晚上酶切过夜,第二天跑胶检测。

楼主,想请教一下,挑了单克隆,在1ml离心管中扩培,提的质粒,浓度大致是多少,我的扩培十个小时左右,质粒浓度20-30ng,是不是太低了
踏实
6楼2014-07-15 17:33:16
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泥鳅越钻越深

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


呀薯条(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-15 18:37:50
我之前是这么办的,效果没影响。就是涂完板之后先放那,或者先放一两个小时,晚上再放进去,一早来正好。
Decision Is So Important !
7楼2014-07-15 17:55:33
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by hajierlove at 2014-07-15 17:33:16
楼主,想请教一下,挑了单克隆,在1ml离心管中扩培,提的质粒,浓度大致是多少,我的扩培十个小时左右,质粒浓度20-30ng,是不是太低了...

挑单克隆后,在2mlLB中摇(含抗生素),最后用20ulTER溶解,每次我做约400-500ng/ul。
8楼2014-07-15 20:14:23
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