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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 连接转化实验
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呀薯条

金虫 (小有名气)

[求助] 连接转化实验 已有5人参与

为了提高连接效率，我通常都是连接过夜。有个问题，一直很疑惑，想和大家讨论下：就是有时做到转化步骤，刚好是半上午或者中午，那这样涂好平板后，置于37度开始培养，到晚上11点左右，还只有 零星几个菌落，那我是这个晚上继续培养呢，还是室温放置，让它缓慢培养？因为要是仍置于37度的话，等到第二天早上，已经超过16个小时，可能会有卫星菌落产生，这个不是就会对阳性菌落的挑选有影响？
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1楼 2014-06-24 21:09:43
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seven拂晓

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-06-25 08:28:17
过夜连接的产物可以先放到4度冰箱里 多连几个小时不是事  我导师说他们以前都是16度连24小时，再4度连24小时的。下午3、4点再做转化吧
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2楼2014-06-24 23:26:18
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
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呀薯条(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-25 13:26:42
我用neb的连接酶，一般16度连个把小时，甚至就半小时，直接转化，效果一直挺好

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2014-06-25 08:51:14
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
呀薯条(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-06-25 13:26:58
你那个晚上室温放置，让它缓慢培养比较好。第二天早上一来，就长得挺大，挑单克隆，下午五点多提质粒，晚上酶切过夜，第二天跑胶检测。
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4楼2014-06-25 08:55:50
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yzj926521

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
呀薯条(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-25 13:27:09
呀薯条: 金币+2, ★有帮助 2014-06-30 08:54:47
可以选择过夜连接后，在次日的下午3-4点中做转化，培养一夜时间能刚好的
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5楼2014-06-25 09:55:53
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hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-06-25 08:55:50
你那个晚上室温放置，让它缓慢培养比较好。第二天早上一来，就长得挺大，挑单克隆，下午五点多提质粒，晚上酶切过夜，第二天跑胶检测。

楼主，想请教一下，挑了单克隆，在1ml离心管中扩培，提的质粒，浓度大致是多少，我的扩培十个小时左右，质粒浓度20-30ng，是不是太低了
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踏实
6楼2014-07-15 17:33:16
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泥鳅越钻越深

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
呀薯条(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-15 18:37:50
我之前是这么办的，效果没影响。就是涂完板之后先放那，或者先放一两个小时，晚上再放进去，一早来正好。
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Decision Is So Important !
7楼2014-07-15 17:55:33
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by hajierlove at 2014-07-15 17:33:16
楼主，想请教一下，挑了单克隆，在1ml离心管中扩培，提的质粒，浓度大致是多少，我的扩培十个小时左右，质粒浓度20-30ng，是不是太低了...

挑单克隆后，在2mlLB中摇（含抗生素），最后用20ulTER溶解，每次我做约400-500ng/ul。
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8楼2014-07-15 20:14:23
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