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汕头大学海洋科学接受调剂
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夏末忆雪

新虫 (初入文坛)

[求助] 带有his-tag的tev酶是不是无法从ni柱上直接切割蛋白? 已有1人参与

自己纯化的tev酶带有his-tag,将它用于从ni柱上切割目的蛋白时,发现效率很低很低,是否是因为tev本身带有his-tag,挂到柱子上了,导致效率很低?还是说我本身的操作有问题。操作为:室温,摇床切2h。
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99蜗牛99

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 夏末忆雪 at 2014-06-25 22:26:33
咪唑对蛋白或者TEV酶切效率没有影响吗?一般切多久呢?室温or4℃?...

您好,请教一下,将酶切后的溶液再过一次镍柱分离的物质是6his标签与目的蛋白吗?TEV酶本身不会混到目的蛋白中吗?如果会,怎么样才能得到只有目的蛋白的溶液呢?
7楼2015-08-14 16:55:41
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Davie_Meagen

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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夏末忆雪: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-06-26 16:08:44
一般我们是先将蛋白洗脱下来,在溶液中进行酶切。酶切完后透析去除咪唑,再过一次镍柱。目的蛋白在流穿液中。
2楼2014-06-24 15:02:56
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夏末忆雪

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Davie_Meagen at 2014-06-24 15:02:56
一般我们是先将蛋白洗脱下来,在溶液中进行酶切。酶切完后透析去除咪唑,再过一次镍柱。目的蛋白在流穿液中。

咪唑对蛋白或者TEV酶切效率没有影响吗?一般切多久呢?室温or4℃?
3楼2014-06-25 22:26:33
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Davie_Meagen

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 夏末忆雪 at 2014-06-25 22:26:33
咪唑对蛋白或者TEV酶切效率没有影响吗?一般切多久呢?室温or4℃?...

咪唑TEV酶切效率没有影响。一般4℃,在透析袋中,透析酶切一起过夜。
4楼2014-06-26 14:38:16
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