24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2362  |  回复: 7

夏末忆雪

新虫 (初入文坛)

[求助] 带有his-tag的tev酶是不是无法从ni柱上直接切割蛋白? 已有1人参与

自己纯化的tev酶带有his-tag,将它用于从ni柱上切割目的蛋白时,发现效率很低很低,是否是因为tev本身带有his-tag,挂到柱子上了,导致效率很低?还是说我本身的操作有问题。操作为:室温,摇床切2h。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Davie_Meagen

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
夏末忆雪: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-06-26 16:08:44
一般我们是先将蛋白洗脱下来,在溶液中进行酶切。酶切完后透析去除咪唑,再过一次镍柱。目的蛋白在流穿液中。
2楼2014-06-24 15:02:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏末忆雪

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Davie_Meagen at 2014-06-24 15:02:56
一般我们是先将蛋白洗脱下来,在溶液中进行酶切。酶切完后透析去除咪唑,再过一次镍柱。目的蛋白在流穿液中。

咪唑对蛋白或者TEV酶切效率没有影响吗?一般切多久呢?室温or4℃?
3楼2014-06-25 22:26:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Davie_Meagen

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 夏末忆雪 at 2014-06-25 22:26:33
咪唑对蛋白或者TEV酶切效率没有影响吗?一般切多久呢?室温or4℃?...

咪唑TEV酶切效率没有影响。一般4℃,在透析袋中,透析酶切一起过夜。
4楼2014-06-26 14:38:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏末忆雪

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Davie_Meagen at 2014-06-26 14:38:16
咪唑TEV酶切效率没有影响。一般4℃,在透析袋中,透析酶切一起过夜。...

好,谢谢!
5楼2014-06-26 16:08:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hello_real

新虫 (初入文坛)

个人觉得不太好,这只是理论上的可行性。最近在用TEV切,换了好多条件都切不开啊,都没办法啦
6楼2014-08-27 14:29:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

99蜗牛99

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 夏末忆雪 at 2014-06-25 22:26:33
咪唑对蛋白或者TEV酶切效率没有影响吗?一般切多久呢?室温or4℃?...

您好,请教一下,将酶切后的溶液再过一次镍柱分离的物质是6his标签与目的蛋白吗?TEV酶本身不会混到目的蛋白中吗?如果会,怎么样才能得到只有目的蛋白的溶液呢?
7楼2015-08-14 16:55:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc-material

专家顾问 (职业作家)

同请教,将酶切后的溶液再过一次镍柱分离的物质是6his标签与目的蛋白吗?TEV酶本身不会混到目的蛋白中吗?如果会,怎么样才能得到只有目的蛋白的溶液呢?
8楼2015-08-24 17:22:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 夏末忆雪 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 290求调剂 +5 柯淮然 2026-04-12 7/350 2026-04-12 05:04 by labixiaoqiao
[考研] 一志愿西北工业大学289 085602 +32 yang婷 2026-04-10 33/1650 2026-04-12 02:41 by 秋豆菜芽
[考研] 291求调剂 +7 关忆北. 2026-04-11 7/350 2026-04-11 23:48 by baobaoye
[考研] 270求调剂 +14 杨乐369 2026-04-11 14/700 2026-04-11 20:16 by 蓝云思雨
[考研] 0854调剂 +5 音像店听花鼓戏 2026-04-10 5/250 2026-04-11 10:49 by qingpingzhu
[考研] 生物学调剂 可调剂到生物与医药 +8 李政莹 2026-04-06 9/450 2026-04-11 10:36 by wwj2530616
[考研] 080500求调剂 +17 黄宇博 2026-04-06 17/850 2026-04-11 08:36 by zhq0425
[考研] 263能源动力专硕求调剂 +3 加大号饭盒袋 2026-04-10 3/150 2026-04-10 22:23 by 286640313
[考研] 人工智能320调剂08工类还有机会吗 +11 振—TZ 2026-04-10 11/550 2026-04-10 21:51 by blankyung
[考研] 307求调剂 +8 tzq94092 2026-04-10 8/400 2026-04-10 17:33 by 286640313
[考研] 284求调剂 +7 让我上岸吧阿西 2026-04-09 7/350 2026-04-09 18:59 by haironglove
[考研] 085600材料与化工301分求调剂院校 +33 刺痛jk 2026-04-06 34/1700 2026-04-09 18:31 by hy861222
[考研] 一志愿985初试354分生物调剂 +3 031001 2026-04-06 3/150 2026-04-09 00:30 by Evan_Liu
[考研] 机械工程313分找工科调剂 +3 双一流本科机械 2026-04-08 3/150 2026-04-08 20:41 by 土木硕士招生
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +16 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-05 16/800 2026-04-08 16:02 by luoyongfeng
[考研] 求考研材料调剂 +3 材化李可 2026-04-07 3/150 2026-04-08 00:21 by JourneyLucky
[考研] 344求调剂 +11 魏子per 2026-04-07 11/550 2026-04-07 23:01 by JourneyLucky
[考研] 一志愿苏州大学材料工程(085601)专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +11 大火山小火山 2026-04-05 11/550 2026-04-06 22:55 by yunlongyang
[考研] 327考研调剂推荐 +6 呜呜呜呜呢 2026-04-06 6/300 2026-04-06 21:39 by 啵啵啵0119
[考研] 307求调剂 +3 所念及所望 2026-04-06 3/150 2026-04-06 17:30 by 土木硕士招生
信息提示
请填处理意见