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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 带有his-tag的tev酶是不是无法从ni柱上直接切割蛋白？
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夏末忆雪

新虫 (初入文坛)

[求助] 带有his-tag的tev酶是不是无法从ni柱上直接切割蛋白？ 已有1人参与

自己纯化的tev酶带有his-tag，将它用于从ni柱上切割目的蛋白时，发现效率很低很低，是否是因为tev本身带有his-tag，挂到柱子上了，导致效率很低？还是说我本身的操作有问题。操作为：室温，摇床切2h。
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1楼 2014-06-23 17:38:29
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夏末忆雪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Davie_Meagen at 2014-06-24 15:02:56
一般我们是先将蛋白洗脱下来，在溶液中进行酶切。酶切完后透析去除咪唑，再过一次镍柱。目的蛋白在流穿液中。

咪唑对蛋白或者TEV酶切效率没有影响吗？一般切多久呢？室温or4℃？
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3楼2014-06-25 22:26:33
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Davie_Meagen

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
夏末忆雪: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-06-26 16:08:44
一般我们是先将蛋白洗脱下来，在溶液中进行酶切。酶切完后透析去除咪唑，再过一次镍柱。目的蛋白在流穿液中。
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2楼2014-06-24 15:02:56
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Davie_Meagen

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 夏末忆雪 at 2014-06-25 22:26:33
咪唑对蛋白或者TEV酶切效率没有影响吗？一般切多久呢？室温or4℃？...

咪唑TEV酶切效率没有影响。一般4℃，在透析袋中，透析酶切一起过夜。
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4楼2014-06-26 14:38:16
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夏末忆雪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Davie_Meagen at 2014-06-26 14:38:16
咪唑TEV酶切效率没有影响。一般4℃，在透析袋中，透析酶切一起过夜。...

好，谢谢！
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5楼2014-06-26 16:08:28
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