24小时热门版块排行榜    

查看: 4920  |  回复: 24
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

冷雁孤旅

木虫 (著名写手)

[求助] 荧光定量PCR 扩增曲线求助 已有6人参与

诸位大侠我的试剂是使用SYBR.TAKARA的,机子是AB7300,但是做出来的扩增曲线不稳定啊。做的时候很多有时候做的还行,但是在有的时候扩增曲线出现在基线上面,有时候就是没有平台期,扩增曲线乱七八糟的。想问问这是什么原因呢?我从以下3方面入手解决。1.试剂 (开启后4°避光保存) 2。加样误差(已经很小心了) 3.仪器的稳定性(换了扩增的孔道)。事实上到现在都没查出来是什么原因。求教诸位大侠这究竟是怎么回事,问了其他实验室的师兄他们也不是很清楚。下面是我的图片。

荧光定量PCR 扩增曲线求助
IEF扩增曲线(58.5).jpg


荧光定量PCR 扩增曲线求助-1
IEF标准曲线.jpg


荧光定量PCR 扩增曲线求助-2
平行1溶解曲线.jpg


荧光定量PCR 扩增曲线求助-3
扩增曲线3号平行.jpg
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验 QPCR 问题简答

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

生命不息奋斗不止
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冷雁孤旅

木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-06-23 20:34:35
之前我们也碰到过类似的情况,分析原因是由于buffer造成的线性扩增效应出了问题,换了buffer体系以后一下就OK了。换的时候是以降低扩增效率(速率)为策略的

我使用的额是SYBR I里面的 BUFFER早就加入进去了 这个不能换吧
生命不息奋斗不止
7楼2014-06-23 20:40:47
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 25 个回答

冷雁孤旅

木虫 (著名写手)

生命不息奋斗不止
2楼2014-06-22 16:29:14
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冷雁孤旅

木虫 (著名写手)

版主在不在 @飞约疯人院 求分析
生命不息奋斗不止
3楼2014-06-23 20:00:07
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
冷雁孤旅: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-06-23 20:37:24
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-06-24 08:57:20
没有平台期:
1可能是模板,引物,镁离子,酶、dntps浓度有点高,建议优化下
2分析可能 模板太浓,稀释10倍100倍1000倍
3是否目的基因表达的水平较低,扩增起飞较晚还没达到平台期.
人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
4楼2014-06-23 20:32:22
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +15 医学老男孩 2026-08-20 18/900 2026-08-21 13:46 by 医学老男孩
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +5 chengyan1220 2026-08-21 5/250 2026-08-21 12:34 by gltch
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +15 archvillain 2026-08-15 27/1350 2026-08-21 11:32 by tim76
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +15 kkkl_v 2026-08-19 16/800 2026-08-21 11:22 by 365372687
[基金申请] 科研孤儿太难了 +15 我4大白菜 2026-08-20 16/800 2026-08-21 11:07 by yming1319
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 让我中一个面上吧! +10 大萍1987 2026-08-20 12/600 2026-08-21 09:31 by 020100099
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +4 archvillain 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:10 by gatelove
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
信息提示
请填处理意见