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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » fermentas双酶切体系
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emily-lhy

新虫 (小有名气)

[求助] fermentas双酶切体系

The first digestion should be performed in 1X Tango buffer (low salt concentration buffer) with BcuI (SpeI). Incubate at 37°C for 1 hour.
When the first digestion is complete, add 10X concentrated Tango buffer (amount "V" to a final 2X concentration (high salt concentration buffer) and 2-fold excess of SalI.
        V=A/8,   A - the starting volume of the reaction mixture.
Incubate at 37°C for 1 hour.
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1楼 2014-06-13 14:36:39
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syhorchid
★
emily-lhy(金币+1): 谢谢参与
2楼2014-06-13 14:48:13
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nono2009
★
emily-lhy(金币+1): 谢谢参与
3楼2014-06-13 15:03:15
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lixn900827
4楼2014-06-13 15:16:43
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Neo2000

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
怎么你不知道他们家的快切酶都一个buffer的

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2014-06-13 16:33:28
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393658000

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-06-17 11:40:12
多简单，1Xtango 酶切SpeI，直到你确定这个酶酶切完全，然后80度煮灭活以后，再添加Tango至浓度为2Xtango,在加入SalI，因为SalI在2Xtango的体系里面活性不是100%（貌似是50-100），所以你的SalI要加倍，因此就要加入2X的SalI.
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6楼2014-06-16 17:52:54
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