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眼泪笑了23

新虫 (小有名气)

[求助] 请问在提RNA的时候,用氯仿:异戊醇=24:1,还是用氯仿? 已有4人参与

请问各位高手,在提取RNA的时候,是可以使用氯仿:异戊醇=24:1,还是可以使用氯仿?
二者有什么区别呢?加氯仿的那一步,可以剧烈震荡吗?有人说剧烈震荡回造成DNA污染?
现在室温有点高,操作在冰上进行?

请各位高手指点一二
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wangyue115

木虫 (正式写手)

冰山火种

引用回帖:
8楼: Originally posted by yzq6098273 at 2014-08-05 15:00:43
你好,TRIzol法提RNA是加酚:氯仿:异戊醇=25:24:1(ph<5.0)好呢?还是氯仿:异戊醇=24:1,PH有要求吗?非常感谢。...

TRIzol法中,TRIzol中已经含有酚了,因此不必再加酚,用纯氯仿就可以了,PH也不用调整。
9楼2014-08-06 00:23:51
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查看全部 9 个回答

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-06-12 13:00:33
我从来不用异戊醇,那玩意味道太重太难闻,也没必要加的,至于后面那个问题,纯属个人见解,没参考意义。

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-06-11 18:37:41
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wangyue115

木虫 (正式写手)

冰山火种

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-06-12 13:00:36
异戊醇的作用是调整极性,使氯仿更高效的萃取酚等有机物以及令蛋白质变性。
关于振荡的问题:如果你采用的是TRIzol一步法,剧烈振荡的确有可能使部分DNA碎片进入水相。如果是分步除杂,问题不大。
低温操作主要是为了降低RNA酶的活性,为了RNA的完整性,尽量低温操作。
3楼2014-06-12 00:10:23
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匿名

用户注销 (正式写手)

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-06-12 13:00:39
本帖仅楼主可见
4楼2014-06-12 09:58:26
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