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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » DNA提取时苯酚 : 氯仿 : 异戊醇(25 : 24 : 1)溶液抽提是怎么操作的？？？
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cr7ka8

金虫 (初入文坛)

[求助] DNA提取时苯酚 : 氯仿 : 异戊醇(25 : 24 : 1)溶液抽提是怎么操作的？？？ 已有4人参与

如题，DNA提取时加入苯酚 : 氯仿 : 异戊醇(25 : 24 : 1)后，抽提是怎么操作的?
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1楼 2014-04-27 12:53:21
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

Hliotrope

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cr7ka8 at 2014-04-27 17:43:59
那转速，温度有什么要求吗？...

温度常温就行，转速能离下来就可以，大概7000到120000的样子，我之前看到一个方法中用12000，后来我用7830也能离。。
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Someone
7楼2014-04-27 19:50:36
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逍遥e宝

铁杆木虫 (正式写手)

我爱黄赌毒

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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cr7ka8: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-04-28 18:49:20
我们一般是加好之后，震荡混匀，然后4度离心12000转 3min，重复三次，后单独氯仿，重复一次。
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无数老鼠的生命祭奠了我被偷走的那五年---------------forever宝
8楼2014-04-28 10:00:52
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普通回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cr7ka8: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-04-27 20:46:00
我提的时候用氯仿抽三次就好，不剧烈混匀的，不过现在用试剂盒抽更好

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2楼2014-04-27 13:06:55
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cr7ka8

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-27 13:06:55
我提的时候用氯仿抽三次就好，不剧烈混匀的，不过现在用试剂盒抽更好

就加进去稍稍混匀就可以了吗?不用离心什么的吗
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3楼2014-04-27 13:10:55
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Hliotrope

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
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cr7ka8: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-04-27 20:45:48
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-27 21:55:57
加入后摇匀，然后离心，会分层，取上层，别沾到中间的白色沉淀，那是蛋白沉淀。
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Someone
4楼2014-04-27 14:57:26
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cr7ka8

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Hliotrope at 2014-04-27 14:57:26
加入后摇匀，然后离心，会分层，取上层，别沾到中间的白色沉淀，那是蛋白沉淀。

那转速，温度有什么要求吗？
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5楼2014-04-27 17:43:59
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raoreng
6楼2014-04-27 19:01:03
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hutil1543

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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cr7ka8: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-04-28 18:49:26
个人经验，首先一定要用力摇匀，别怕破坏DNA不会的，如果不摇匀会影响后面的电泳的，经验之谈。然后就是离心我是140000rpm，15min，这样离的紧一些，离两次基本就没有蛋白了。
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9楼2014-04-28 14:22:15
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东方爱饭

新虫 (初入文坛)
那一次加入的酚氯仿异戊醇的量是多少呢？
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10楼2015-12-03 08:54:41
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