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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA 酚污染 怎么避免？
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我是小纯洁

金虫 (正式写手)

[求助] RNA 酚污染 怎么避免？

 

这是我的rna，用的是trizol法，但是发现吸收峰在270，也就是说，可能有酚污染。那请问，怎样避免这种污染呢？
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1楼 2011-12-15 16:43:21
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他她0328

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+1): 鼓励交流。但是RNA会损失很多。 2011-12-29 17:42:53
酚污染的话可以用氯仿：异戊醇（24:1）抽提一下，酚溶于氯仿的
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2楼2011-12-15 17:14:53
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yanyuan

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
取材时候迅速放液氮，操作过程尽量在低温条件下，实验用具最好都DEPC处理...
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3楼2011-12-20 15:42:06
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southboy

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
增加抽提次数就行吧。
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4楼2011-12-29 17:28:28
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longrna

新虫 (正式写手)
如果是酚污染：加200氯仿抽提离心得到上清后再加等体积的氯仿（400-500）抽提一次。
问题是不知道是不是酚污染而造成在270吸光值.....
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伟大航线....
5楼2011-12-30 09:33:23
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
加了氯仿抽提之后，吸上清不要贪多。RNA要的是纯度，浓度一般不成问题。碰到下层就会有酚的污染。
再有就是用酒精漂洗的时候，尽量让沉淀块整块悬浮起来，这样洗得干净，能减少酚等杂质。但是如果不能漂浮起来就算了，不要把沉淀弄散了。
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6楼2011-12-30 14:41:00
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jiaxinfish

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
c从你的图看，应该是可以用的，270有吸收，也不一定是酚污染，退一步讲，即使酚污染了又能证明样，只要实验能做出来就行了，你的RNA质量还是很高的，可以看到完整的 rRNA，我的建议是你可以往下做，不用管那些什么酚，胆子可以大一点。
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7楼2011-12-30 16:16:19
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