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我是小纯洁

金虫 (正式写手)

[求助] RNA 酚污染 怎么避免?

 

这是我的rna,用的是trizol法,但是发现吸收峰在270,也就是说,可能有酚污染。那请问,怎样避免这种污染呢?
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他她0328

银虫 (小有名气)

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西瓜(金币+1): 鼓励交流。但是RNA会损失很多。 2011-12-29 17:42:53
酚污染的话可以用氯仿:异戊醇(24:1)抽提一下,酚溶于氯仿的
2楼2011-12-15 17:14:53
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yanyuan

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
取材时候迅速放液氮,操作过程尽量在低温条件下,实验用具最好都DEPC处理...
3楼2011-12-20 15:42:06
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southboy

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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增加抽提次数就行吧。
4楼2011-12-29 17:28:28
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longrna

新虫 (正式写手)

如果是酚污染:加200氯仿抽提离心得到上清后再加等体积的氯仿(400-500)抽提一次。
问题是不知道是不是酚污染而造成在270吸光值.....
伟大航线....
5楼2011-12-30 09:33:23
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

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加了氯仿抽提之后,吸上清不要贪多。RNA要的是纯度,浓度一般不成问题。碰到下层就会有酚的污染。
再有就是用酒精漂洗的时候,尽量让沉淀块整块悬浮起来,这样洗得干净,能减少酚等杂质。但是如果不能漂浮起来就算了,不要把沉淀弄散了。
6楼2011-12-30 14:41:00
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jiaxinfish

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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c从你的图看,应该是可以用的,270有吸收,也不一定是酚污染,退一步讲,即使酚污染了又能证明样,只要实验能做出来就行了,你的RNA质量还是很高的,可以看到完整的 rRNA,我的建议是你可以往下做,不用管那些什么酚,胆子可以大一点。
7楼2011-12-30 16:16:19
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