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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 请问在提RNA的时候，用氯仿：异戊醇=24:1，还是用氯仿？
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眼泪笑了23

新虫 (小有名气)

[求助] 请问在提RNA的时候，用氯仿：异戊醇=24:1，还是用氯仿？ 已有4人参与

请问各位高手，在提取RNA的时候，是可以使用氯仿：异戊醇=24:1，还是可以使用氯仿？
二者有什么区别呢？加氯仿的那一步，可以剧烈震荡吗？有人说剧烈震荡回造成DNA污染？
现在室温有点高，操作在冰上进行？

请各位高手指点一二
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1楼 2014-06-11 18:28:45
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-06-12 13:00:33
我从来不用异戊醇，那玩意味道太重太难闻，也没必要加的，至于后面那个问题，纯属个人见解，没参考意义。

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-06-11 18:37:41
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wangyue115

木虫 (正式写手)

冰山火种

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-06-12 13:00:36
异戊醇的作用是调整极性，使氯仿更高效的萃取酚等有机物以及令蛋白质变性。
关于振荡的问题：如果你采用的是TRIzol一步法，剧烈振荡的确有可能使部分DNA碎片进入水相。如果是分步除杂，问题不大。
低温操作主要是为了降低RNA酶的活性，为了RNA的完整性，尽量低温操作。
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3楼2014-06-12 00:10:23
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匿名

用户注销 (正式写手)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-06-12 13:00:39
本帖仅楼主可见
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4楼2014-06-12 09:58:26
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夏至1990

金虫 (小有名气)

小小虫

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
眼泪笑了23(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-06 09:23:23
苯酚，氯仿，异戊醇。25:24:1是剧烈震荡，提的RNA还好啊，提RNA 没有专用的RNA台子吗，提RNA最怕污染，RNA酶到处都是啊，再说房间有空调啊，楼主加油啊
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Sodoyouwanttotakealeapoffaith…orbecomeanoldman,filledwithregret…waitingtodiealone?
5楼2014-06-12 17:25:08
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夏至1990

金虫 (小有名气)

小小虫

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 夏至1990 at 2014-06-12 17:25:08
苯酚，氯仿，异戊醇。25:24:1是剧烈震荡，提的RNA还好啊，提RNA 没有专用的RNA台子吗，提RNA最怕污染，RNA酶到处都是啊，再说房间有空调啊，楼主加油啊

在刚开始提取的时候是加氯仿，最后进行消化的时候是加上面的苯酚，氯仿，异戊醇，说错了，难道提取的方法不大一样，楼主提取什么的RNA
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Sodoyouwanttotakealeapoffaith…orbecomeanoldman,filledwithregret…waitingtodiealone?
6楼2014-06-12 17:27:19
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yzq6098273

金虫 (小有名气)
你好，TRIzol法提RNA是加酚：氯仿：异戊醇=25：24：1（ph<5.0）好呢？还是氯仿：异戊醇=24：1，PH有要求吗？
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天外飞仙
7楼2014-08-05 14:58:10
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yzq6098273

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wangyue115 at 2014-06-12 00:10:23
异戊醇的作用是调整极性，使氯仿更高效的萃取酚等有机物以及令蛋白质变性。
关于振荡的问题：如果你采用的是TRIzol一步法，剧烈振荡的确有可能使部分DNA碎片进入水相。如果是分步除杂，问题不大。
低温操作主要是 ...

你好，TRIzol法提RNA是加酚：氯仿：异戊醇=25：24：1（ph<5.0）好呢？还是氯仿：异戊醇=24：1，PH有要求吗？非常感谢。
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天外飞仙
8楼2014-08-05 15:00:43
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wangyue115

木虫 (正式写手)

冰山火种
引用回帖:
8楼: Originally posted by yzq6098273 at 2014-08-05 15:00:43
你好，TRIzol法提RNA是加酚：氯仿：异戊醇=25：24：1（ph<5.0）好呢？还是氯仿：异戊醇=24：1，PH有要求吗？非常感谢。...

TRIzol法中，TRIzol中已经含有酚了，因此不必再加酚，用纯氯仿就可以了，PH也不用调整。
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9楼2014-08-06 00:23:51
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