应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR扩不出来，请问这是什么原因
91/1返回列表
查看: 1716  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

liufang1006

木虫 (正式写手)

[求助] PCR扩不出来，请问这是什么原因 已有5人参与

我用的反应体系是10ul的，具体如下：
水：7.2
buffer：1
dNTP:0.8
模板：0.5
引物：0.2
taq酶：0.1
扩出来结果如图所示，请大家帮我分析分析一下？

PCR扩不出来，请问这是什么原因
Image0.5ul-4.5+5.1.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
风雨无悔人生路！没有吃不了的苦，只有享不了的福！
1楼 2014-06-11 10:08:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liug268

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-06-11 12:26:30
liufang1006: 金币+1 2014-06-12 09:03:07
在不知道模板，引物和扩增片段长度等情况的条件下，只能说引物二聚体比较严重。
赞一下 回复此楼
2楼2014-06-11 10:12:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-06-11 12:26:37
liufang1006: 金币+2 2014-06-12 09:10:31
二聚体严重，可能是退火温度的问题
当然也不排除是引物问题

看你上面的胶是跑出来了，条带不明显

你可以换下模板试下
赞一下 回复此楼
天行健
3楼2014-06-11 11:10:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangweijian

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-15 20:59:18
1.更换模板
2.更换了模板还是这样的话，重新设计引物吧
赞一下 回复此楼
4楼2014-06-11 21:46:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

动力泉

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liufang1006(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-12 08:56:59
应该是退火温度太低，适当提高温度

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
好好学习
5楼2014-06-11 22:04:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

junior850621

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liufang1006(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-12 08:57:06
你加的东西看不出问题。pcr关键的条件是引物Tm值和退火温度的关系。另外你也没有透露目的条带大小和你的延伸时间。
赞一下 回复此楼
6楼2014-06-12 00:03:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liufang1006

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by junior850621 at 2014-06-12 00:03:19
你加的东西看不出问题。pcr关键的条件是引物Tm值和退火温度的关系。另外你也没有透露目的条带大小和你的延伸时间。

我的目的条带是260，mark中最亮的是250，延伸时间是30s
赞一下 回复此楼
风雨无悔人生路！没有吃不了的苦，只有享不了的福！
7楼2014-06-12 09:10:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liufang1006

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-06-11 11:10:57
二聚体严重，可能是退火温度的问题
当然也不排除是引物问题

看你上面的胶是跑出来了，条带不明显

你可以换下模板试下

谢谢，我将模板稀释后就扩出来了
赞一下 回复此楼
风雨无悔人生路！没有吃不了的苦，只有享不了的福！
8楼2014-06-12 09:11:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蜗牛ccw

新虫 (初入文坛)
可能引物的问题
回复此楼
9楼2014-06-30 09:55:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liufang1006 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +7 Lanmanbaby 2026-08-09 14/700 2026-08-09 23:33 by Tide man
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +4 布布和一二 2026-08-08 4/200 2026-08-09 22:24 by otj2008
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +15 且听虎啸 2026-08-07 22/1100 2026-08-09 22:13 by 布布和一二
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +10 布布和一二 2026-08-08 21/1050 2026-08-09 17:21 by 天神眷顾
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭